တိရစ္ဆာန်တစ်ရှူး တိုက်ရိုက် PCR အစုံ-UNG (နမူနာကိရိယာများမပါဘဲ) ပရိုတိုကော
ဖော်ပြချက်
ဤကိရိယာသည် PCR တုံ့ပြန်မှုများအတွက် တိရစ္ဆာန်တစ်ရှူးနမူနာများမှ မျိုးဗီဇ DNA ကို လျင်မြန်စွာထုတ်လွှတ်ရန် ထူးခြားသော lysis ကြားခံစနစ်ကို အသုံးပြုထားသောကြောင့် ၎င်းသည် အကြီးစားမျိုးရိုးဗီဇစစ်ဆေးမှုအတွက် အထူးသင့်လျော်ပါသည်။
lysis ကြားခံမှ genomic DNA ကို ထုတ်လွှတ်သည့် လုပ်ငန်းစဉ်သည် 65°C တွင် 10-30 မိနစ်အတွင်း ပြီးဆုံးသည်။ပရိုတင်းနှင့် RNA ဖယ်ရှားခြင်းကဲ့သို့သော အခြားလုပ်ငန်းစဉ်များ မလိုအပ်ဘဲ၊ ထွက်ရှိလာသော ခြေရာခံ DNA ကို PCR တုံ့ပြန်မှုအတွက် ပုံစံပလိတ်အဖြစ် အသုံးပြုနိုင်သည်။
2 × PCR လွယ်ကူသည်။TMMix (UNG) သည် 2×PCR လွယ်ကူမှုကို အခြေခံ၍ dTTP အစား dUTP ကို အသုံးပြုသည်။TMရောနှောပြီး dUTP ပါရှိသော ပုံစံခွက်ကို တချိန်တည်းတွင် ပြိုကွဲစေမည့် UNG အင်ဇိုင်း (Uracil-N-glycosylase) ကို ပေါင်းထည့်သည်။PCR တုံ့ပြန်မှုမပြုမီ၊ UNG အင်ဇိုင်းကို uracil ပါရှိသော PCR ထုတ်ကုန်ကို ဖြိုခွဲရန်အတွက် အသုံးပြုသည်။UNG အင်ဇိုင်းသည် uracil ပါ၀င်ခြင်းမရှိသော ပုံစံပေါ်တွင် အကျိုးသက်ရောက်မှုရှိမည်မဟုတ်ပါ၊ ထို့ကြောင့် ချဲ့ထွင်ခြင်း၏တိကျမှုနှင့် တိကျမှုကိုသေချာစေပြီး အကြီးစားမျိုးရိုးဗီဇစမ်းသပ်မှုအတွင်း PCR ထုတ်ကုန်များညစ်ညမ်းခြင်းဖြစ်နိုင်ခြေကို ကာကွယ်ပေးသည်။
D-Taq DNA polymerase သည် တိုက်ရိုက် PCR တုံ့ပြန်မှုများအတွက် Foregene မှ အထူးထုတ်လုပ်ထားသော DNA polymerase ဖြစ်သည်။D-Taq DNA polymerase သည် PCR တုံ့ပြန်မှုတားဆေးအမျိုးမျိုးကို ပြင်းထန်စွာခံနိုင်ရည်ရှိပြီး ရှုပ်ထွေးသောတုံ့ပြန်မှုစနစ်အမျိုးမျိုးတွင် DNA ၏ခြေရာခံပမာဏကို ထိရောက်စွာချဲ့ထွင်နိုင်ပြီး Direct PCR တုံ့ပြန်မှုအတွက် အထူးသင့်လျော်သည့် 2Kb/min သို့ရောက်ရှိနိုင်သည်။
Kit အစိတ်အပိုင်းများ
အပိုင်း | ကြားခံ AL |
Foregene Protease | |
6× DNA Loading Buffer | |
ဒုတိယပိုင်း | 2 × PCR လွယ်ကူသည်။TMရောနှော(UNG) |
အင်္ဂါရပ်များနှင့် အားသာချက်များ
■အချိန်ကုန်ပြီး ဈေးကြီးသော DNA သန့်စင်ခြင်းမျိုး မရှိပါ။
■ နမူနာလိုအပ်ချက်သည် သေးငယ်သည်၊ 5mg တိရစ္ဆာန်တစ်သျှူးများကို စမ်းသပ်နိုင်သည်။
■ ကြိတ်ခွဲခြင်းနှင့် ကြိတ်ခြင်းကဲ့သို့သော အထူးကုသမှု မလိုအပ်ဘဲ ခွဲစိတ်မှုမှာ ရိုးရှင်းပါသည်။
■ Optimized PCR စနစ်သည် PCR တွင် ပိုမိုတိကျသော တိကျမှုနှင့် PCR တုံ့ပြန်မှုတားဆေးများကို ပိုမိုခံနိုင်ရည်ရှိစေသည်။
■ ညစ်ညမ်းမှုတိုက်ဖျက်ရေး PCR စနစ် ၂×PCR လွယ်ကူသည်။TMMix (UNG) သည် PCR ထုတ်ကုန်များကြောင့် ဖြစ်ပေါ်လာသော လေထုညစ်ညမ်းမှုကို ထိရောက်စွာ ဖယ်ရှားပေးပြီး အသံချဲ့စက်၏ တိကျမှုနှင့် တိကျမှုကို သေချာစေသည်။
Kit ဘောင်များ
လျှောက်လွှာ: တိရစ္ဆာန်တစ်ရှူးအမျိုးမျိုး။
နမူနာ lysis မှ ထုတ်လွှတ်သော DNA- PCR နမူနာပုံစံအဖြစ်သာ အသုံးပြုသည်။
အစုံအလင်ကို အောက်ပါရည်ရွယ်ချက်များအတွက် သုံးနိုင်သည်- transgenosis ကို ဖော်ထုတ်ခြင်း၊ တိရစ္ဆာန် မျိုးရိုးလိုက်ခြင်း စသည်တို့။
လုပ်ငန်းအသွားအလာ
သိုလှောင်မှုနှင့် စင်သက်တမ်း
ဤကိရိယာ၏အပိုင်း ၁ ကို ၂-၈ တွင်သိမ်းဆည်းသင့်သည်။℃.
Buffer AL ဓါတ်ကို ခြောက်သွေ့သောအခြေအနေအောက်တွင် 12 လကြာ သိမ်းဆည်းထားနိုင်သည်။2-8 တွင်သိမ်းဆည်းနိုင်သည်။℃ကြာကြာသိုလှောင်မှုအတွက်။
Reagent Foregene Protease တွင်ထူးခြားသောဖော်မြူလာရှိသည်။၎င်း၏ လုပ်ဆောင်ချက်နှင့် တည်ငြိမ်မှုကို သေချာစေရန်၊ ၎င်းကို 4 တွင် သိမ်းဆည်းပါ။℃12 လ။
Reagent ၆×DNA Loading Buffer ကို 4 တွင်သိမ်းဆည်းနိုင်သည်။℃သို့မဟုတ် -20℃အချိန်ကြာမြင့်စွာ။
ဤကိရိယာ၏အပိုင်း II ကို -20 တွင်သိမ်းဆည်းသင့်သည်။℃.
ဓါတ်ဆေး ၂×PCR လွယ်ကူသည်။TMMix(UNG) ကို မကြာခဏအသုံးပြုပါက 4 တွင်သိမ်းဆည်းနိုင်သည်။℃ကာလတို သိုလှောင်မှု အတွက် (၁၀ ရက်အတွင်း အသုံးပြုရန်)။