Buccal Swab/FTA ကတ် DNA Isolation Kit Buccal Swabs မှ မျိုးရိုးဗီဇ DNA ထုတ်ယူခြင်း သို့မဟုတ် သန့်စင်ခြင်းကိရိယာ
ဖော်ပြချက်
ဤကိရိယာသည် ပါးစောင်များနှင့် FTA ကတ် (သွေးကွက်များ) မှ မြင့်မားသောအာရုံစူးစိုက်မှုရှိသော မျိုးဗီဇ DNA ရရှိရန် ထိရောက်ပြီး လျင်မြန်သောနည်းလမ်းကို ပံ့ပိုးပေးပါသည်။ငါတို့ကုမ္ပဏီကို အသုံးပြု'Foregene Protease နှင့်ပေါင်းစပ်ထားသော ထူးခြားသော DNA သီးသန့်စီလီကာအမြှေးပါးနှင့် ဖော်မြူလာကို မိနစ် 80 အတွင်း ထုတ်ယူနိုင်သည်။အထူးဒီဇိုင်းထုတ်ထားသော အသေးစားသန့်စင်သည့်ကော်လံသည် မျိုးရိုးဗီဇ DNA ကို ချည်နှောင်ထားပြီး DNA ကို ပမာဏအနည်းငယ်ဖြင့် ဖယ်ထုတ်နိုင်သည် (15μl) ရေအောက်ရှာဖွေတွေ့ရှိခြင်း သို့မဟုတ် စမ်းသပ်မှုများအတွက် အဆင်ပြေသည့် ရရှိထားသော မျိုးဗီဇ DNA ၏အာရုံစူးစိုက်မှုကို တိုးမြှင့်ရန် elution စနစ်။ပစ္စည်းကိရိယာသည် တစ်ကြိမ်လျှင် နမူနာတစ်ခု သို့မဟုတ် တစ်ခုထက်ပိုသောနမူနာများကို လုပ်ဆောင်နိုင်ပြီး သန့်စင်ခြင်းလုပ်ငန်းစဉ်သည် ဖီနော၊ ကလိုရိုဖောင်နှင့် အချိန်ကုန်သော isopropanol သို့မဟုတ် အီသနောမိုးရွာသွန်းမှုကဲ့သို့သော အော်ဂဲနစ်ပစ္စည်းများကို ထုတ်ယူရန်မလိုအပ်ဘဲ လုပ်ဆောင်ချက်သည် ရိုးရှင်းပြီး အချိန်ကုန်သက်သာသည်။
သတ်မှတ်ချက်များ
ကြိုတင်ပြင်ဆင်မှု ၅၀
Kit အစိတ်အပိုင်းများ
ကြားခံ ST1 |
ကြားခံ ST2 |
Linear Acrylamide |
Buffer PW |
ကြားခံ WB |
ကြားခံ EB |
Foregene Protease |
DNA သီးသန့်ကော်လံ |
ညွှန်ကြားချက်များ |
အင်္ဂါရပ်များနှင့် အားသာချက်များ
- RNase ညစ်ညမ်းမှုမရှိခြင်း- အစုံလိုက်မှပေးသော DNA-Only Column သည် စမ်းသပ်မှုအတွင်း RNase ကိုထည့်သွင်းခြင်းမပြုဘဲ မျိုးရိုးဗီဇ DNA မှ RNA ကို ဖယ်ရှားနိုင်စေပြီး ဓာတ်ခွဲခန်းတွင် exogenous RNase ညစ်ညမ်းခြင်းမှရှောင်ကြဉ်ပါ။
- မြန်ဆန်သောအမြန်နှုန်း- Foregene Protease သည် အလားတူ ပရိုတင်းများထက် လုပ်ဆောင်ချက်ပိုမိုမြင့်မားပြီး နမူနာများကို လျင်မြန်စွာ ချေဖျက်ပေးသည်။ရိုးရှင်းသောစစ်ဆင်ရေး။
-အဆင်ပြေသည်- အခန်းအပူချိန်တွင် centrifugation ကိုလုပ်ဆောင်ပြီး 4°C အပူချိန်နိမ့်သော centrifugation သို့မဟုတ် DNA ၏ အီသနောမိုးရွာသွန်းမှုအတွက် မလိုအပ်ပါ။
- လုံခြုံစိတ်ချရမှု- အော်ဂဲနစ် ဓာတ်ပစ္စည်းများ ထုတ်ယူရန် မလိုအပ်ပါ။
- အရည်အသွေးမြင့်- ထုတ်ယူထားသော မျိုးရိုးဗီဇ DNA တွင် ကြီးမားသောအပိုင်းအစများ၊ RNA မရှိ၊ RNase မရှိ၊ နှင့် စမ်းသပ်မှုအမျိုးမျိုး၏ လိုအပ်ချက်များကို ဖြည့်ဆည်းပေးနိုင်သော အလွန်နည်းသော အိုင်းယွန်းပါဝင်မှု။
-Micro-elution စနစ်- ၎င်းသည် ရေအောက်ပိုင်းရှာဖွေတွေ့ရှိခြင်း သို့မဟုတ် စမ်းသပ်မှုများအတွက် အဆင်ပြေသည့် မျိုးဗီဇ DNA ၏အာရုံစူးစိုက်မှုကို တိုးမြှင့်ပေးနိုင်သည်။
Kit လျှောက်လွှာ
၎င်းသည် အောက်ပါနမူနာများမှ မျိုးဗီဇ DNA သန့်စင်ရန်အတွက် သင့်လျော်သည်- buccal swabs၊ FTA Card (သွေးစွန်းထင်း)။
သိုလှောင်မှုနှင့် စင်သက်တမ်း
- ဤကိရိယာကို အခန်းအပူချိန် (၁၅-၂၅ ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်တွင်) ခြောက်သွေ့သောအခြေအနေအောက်တွင် ၁၂ လကြာ သိမ်းဆည်းထားနိုင်သည်။အချိန်ပိုကြာအောင် သိမ်းဆည်းလိုပါက 2-8°C တွင် သိမ်းဆည်းနိုင်သည်။
မှတ်ချက်- အပူချိန်နိမ့်သောနေရာတွင် သိမ်းဆည်းထားပါက၊ အဆိုပါဖြေရှင်းချက်သည် မိုးရွာနိုင်ခြေရှိသည်။အသုံးမပြုမီ၊ ဆေးဘူးကို အခန်းအပူချိန်တွင် အချိန်အတိုင်းအတာတစ်ခုအထိ သေချာစွာထားပါ။လိုအပ်ပါက မိုးရေပျော်စေရန် 37°C ရေချိုးခန်းတွင် ၁၀ မိနစ်ခန့် ကြိုတင်အပူပေးပြီး အသုံးမပြုမီ ရောမွှေပါ။
-Foregene Protease ဖြေရှင်းချက်တွင် အခန်းအပူချိန်တွင် အချိန်ကြာမြင့်စွာ သိမ်းဆည်းထားသည့်အခါတွင် ထူးခြားသော ဖော်မြူလာတစ်ခုပါရှိသည်။4°C တွင် သိမ်းဆည်းထားသည့်အခါ ၎င်း၏လုပ်ဆောင်ချက်နှင့် တည်ငြိမ်မှု ပိုကောင်းလာမည်ဖြစ်၍ ၎င်းကို 4°C တွင် သိမ်းဆည်းထားရန် အကြံပြုထားပြီး ၎င်းကို -20°C တွင် မသိမ်းဆည်းရန် သတိရပါ။
သန့်စင်ရေးကော်လံ ပိတ်ဆို့နေသည်။
ဤကိရိယာအစုံတွင်၊ မျိုးရိုးဗီဇ DNA ထုတ်ယူခြင်းလုပ်ငန်းတွင်၊ သန့်စင်သောကော်လံကို စင်ထရီဖဂတ်ရှင်းအဆင့်မပါပဲ နမူနာအင်ဇိုင်းအရောအနှောပေါ်တွင် တိုက်ရိုက်စုပ်ယူထားပြီး နမူနာ၏အင်ဇိုင်းမပြည့်မီမှုနှင့် မြင့်မားသော viscosity ကြောင့် သန့်စင်ရေးကော်လံကို ပိတ်ဆို့သွားနိုင်သည်။
အောက်ပါ ဖြစ်နိုင်သော အကြောင်းအရင်းများမှာ အောက်ပါအတိုင်း ဖြစ်ပါသည်။
1. တစ်ရှူးနမူနာများ၏ အင်ဇိုင်းမပြည့်မီသော အစာခြေခြင်း။
အကြံပြုချက်- Foregene Protease ၏နမူနာလုပ်ဆောင်ချိန်ကို သင့်လျော်စွာ တိုးချဲ့နိုင်သည် သို့မဟုတ် 12,000 rpm (~13,400 × g) တွင် centrifugation ပြီးနောက် 5 မိနစ်ကြာ centrifugation ပြီးနောက် supernatant ကို ယူနိုင်သည်။
2. တစ်ရှူးနမူနာ သို့မဟုတ် ကြီးမားသောတစ်ရှူးများကို အလွန်အကျွံအသုံးပြုခြင်း။
အကြံပြုချက်- နမူနာတွင် Buccal swab 1 ခုထက်မပိုစေရန် အကောင်းဆုံးဖြစ်သည်။နမူနာသည် အလွန်ကြီးမားပါက Buffer ST1၊ Foregene Protease၊ ကြားခံ ST2 ၏ ပမာဏကို တိုးမြှင့်ပါ။
3. နမူနာ viscosity မြင့်မားလွန်းသည်။
အကြံပြုချက်- နမူနာများကို မျိုးရိုးဗီဇ DNA မထုတ်ယူမီ Tris-HCl ၏ 10 mM ဖြင့် သင့်လျော်စွာ ရောနှောနိုင်သည်။
4. သွေးကဒ်အပိုင်းအစများကို စုတ်ယူလိုက်ပါပြီ။
အကြံပြုချက်- သွေးကွက် (FTA Card) မျိုးရိုးဗီဇထုတ်ယူခြင်း အဆင့် 6 ၏ ယာယီဗဟိုချုပ်ကိုင်မှုအချိန်ကို သင့်လျော်စွာ သက်တမ်းတိုးနိုင်ပါသည်။
အထွက်နှုန်းနည်းသော သို့မဟုတ် DNA မရှိပါ။
နမူနာဇာစ်မြစ်၊ နမူနာသိုလှောင်မှုအခြေအနေ၊ နမူနာပြင်ဆင်မှု၊ ခြယ်လှယ်မှုစသည်ဖြင့် မျိုးဗီဇ DNA အထွက်နှုန်းကို ထိခိုက်စေသည့် အကြောင်းရင်းများစွာ ရှိတတ်သည်။
ထုတ်ယူနေစဉ်အတွင်း မျိုးဗီဇ DNA မရပါ။
ဖြစ်နိုင်သော အကြောင်းအရင်းများမှာ အောက်ပါအတိုင်းဖြစ်သည်။
1. နမူနာများ သို့မဟုတ် သိုလှောင်မှုအား အချိန်ကြာမြင့်စွာ မှားယွင်းစွာ ထိန်းသိမ်းခြင်းသည် မျိုးဗီဇ DNA ပျက်စီးခြင်းသို့ ဦးတည်စေသည်။
အကြံပြုချက်- ခံတွင်းစုတ်တံများကို လတ်ဆတ်စွာနမူနာယူသင့်ပြီး မျိုးရိုးဗီဇ DNA ထုတ်ယူခြင်းလုပ်ငန်းများအတွက် ထိန်းသိမ်းထားသော swabs များကို အသုံးပြုရန် မအကြံပြုလိုပါ။သွေးအစက်အပြောက်နမူနာများသည် အရည်အသွေးပြည့်မီကြောင်းနှင့် သိုလှောင်ချိန်သည် အလွန်ရှည်သင့်သည်ဟု သေချာစေသင့်သည်။
2. တစ်သျှူးအနည်းငယ်သာအသုံးပြုခြင်းသည် သက်ဆိုင်ရာ genomic DNA ကို ထုတ်ယူခြင်းမရှိစေပါ။
အကြံပြုချက်- ခွဲစိတ်မှုလမ်းညွှန်ရှိ buccal swab နမူနာနမူနာညွှန်ကြားချက်များကို လိုက်နာပြီး မျိုးရိုးဗီဇထုတ်ယူမှုအတွက် ဆဲလ်များလုံလောက်သော DNA ထုတ်ယူရန်အတွက် ပါးစပ် swab တွင် ဆဲလ်အလုံအလောက်ရှိနေစေရန်၊သွေးကွက်နမူနာထုတ်ယူခြင်းအတွက်၊ သွေးကွက်ဖြတ်ခြင်းဧရိယာကို သင့်လျော်စွာ တိုးမြှင့်နိုင်သည်။
3. Foregene Protease ကို မှားယွင်းစွာ ထိန်းသိမ်းထားသောကြောင့် ၎င်း၏ လုပ်ဆောင်ချက် သို့မဟုတ် အသက်မဝင်ခြင်းကို လျော့နည်းစေသည်။
အကြံပြုချက်- Foregene Protease ၏ သိုလှောင်မှုအခြေအနေများကို အတည်ပြုပါ သို့မဟုတ် အင်ဇိုင်းတုံ့ပြန်မှုအတွက် Foregene Protease အသစ်ဖြင့် အစားထိုးပါ။
4. ကိရိယာအစုံ၏ မမှန်ကန်သော ထိန်းသိမ်းမှု သို့မဟုတ် သိုလှောင်ချိန်သည် ရှည်လျားလွန်းသဖြင့် အစုံလိုက်အတွင်းရှိ အစိတ်အပိုင်းအချို့ ပျက်စီးသွားစေသည်။
အကြံပြုချက်- ဆက်စပ်လုပ်ထုံးလုပ်နည်းများအတွက် Buccal swab DNA သီးခြားခွဲထုတ်ကိရိယာအသစ်ကို ဝယ်ယူပါ။
5. Buffer WB သည် အကြွင်းမဲ့ အီသနော မထည့်ပါ။
အကြံပြုချက်- ကြားခံ WB သည် အကြွင်းမဲ့ အီသနော၏ မှန်ကန်သော ပမာဏကို ထည့်သွင်းကြောင်း အတည်ပြုပါ။
6. သာလွန်ကောင်းမွန်မှုသည် ဆီလီကွန်ဖလင်သို့ မှန်ကန်စွာထည့်မထားပါ။
အကြံပြုချက်- ဆီလီကွန်အမြှေးပါးအလယ်သို့ 65°C ကြိုတင်ပူနွေးထားသော အစက်အစက်များကို စီလီကွန်အမြှေးပါးအလယ်တွင်ထည့်ကာ အလင်းပြန်မှုအားကောင်းစေရန် အခန်းအပူချိန်တွင် 5 မိနစ်ခန့်ထားပါ။
အထွက်နှုန်းနည်းသော မျိုးရိုးဗီဇ DNA ကို သီးခြားခွဲထားသည်။
အောက်ပါ ဖြစ်နိုင်သော အကြောင်းအရင်းများမှာ အောက်ပါအတိုင်း ဖြစ်ပါသည်။
1. နမူနာများ သို့မဟုတ် သိုလှောင်မှုအား အချိန်ကြာမြင့်စွာ မှားယွင်းစွာ ထိန်းသိမ်းခြင်းသည် မျိုးဗီဇ DNA ပျက်စီးခြင်းသို့ ဦးတည်စေသည်။
အကြံပြုချက်- ခံတွင်းစုတ်တံများကို လတ်ဆတ်စွာနမူနာယူထားပြီး မျိုးရိုးဗီဇ DNA ထုတ်ယူရန်အတွက် ထိန်းသိမ်းထားသော swab များကို အသုံးမပြုသင့်ပါ။
2. တစ်ရှူးနမူနာပမာဏသည် အလွန်သေးငယ်ပါက၊ ထုတ်ယူထားသော မျိုးရိုးဗီဇ DNA ပါဝင်မှု လျော့နည်းမည်ဖြစ်သည်။
အကြံပြုချက်- မျိုးရိုးဗီဇ DNA ထုတ်ယူမှုအတွက် လုံလောက်သောဆဲလ်များကို ပါးစပ် swab တွင် ကပ်ထားနိုင်စေရန် လည်ပတ်မှုလမ်းညွှန်ရှိ ပါးစပ်နမူနာနမူနာလမ်းညွှန်ချက်များကို လိုက်နာပါ
3. Foregene Protease ကို မှားယွင်းစွာ ထိန်းသိမ်းထားသောကြောင့် ၎င်း၏ လုပ်ဆောင်ချက် သို့မဟုတ် အသက်မဝင်ခြင်းကို လျော့နည်းစေသည်။
အကြံပြုချက်- Foregene Protease ၏ သိုလှောင်မှုအခြေအနေများကို အတည်ပြုပါ သို့မဟုတ် အင်ဇိုင်းတုံ့ပြန်မှုအတွက် Foregene Protease အသစ်ဖြင့် အစားထိုးပါ။
4. Eluent ပြဿနာများ။
အကြံပြုချက်- elution အတွက် Buffer EB ကိုသုံးပါ။ddH ကိုသုံးရင်2အို သို့မဟုတ် အခြားအရာများ ၊ eluate ၏ pH သည် 7.0 မှ 8.5 ကြားဖြစ်ကြောင်း အတည်ပြုပါ။
5. eluate သည် dropwise ဖြင့် မှန်ကန်စွာ ထည့်ထားခြင်းမရှိပါ။
အကြံပြုချက်- ဆီလီကွန်အမြှေးပါး၏အလယ်တွင် ထင်ရှားသောအစက်များထည့်ကာ အလင်းပြန်မှုအားကောင်းစေရန် အခန်းအပူချိန်တွင် 5 မိနစ်ခန့်ထားပါ။
6. elution အရည်သည် အလွန်နည်းပါသည်။
အကြံပြုချက်- အနည်းဆုံး 15 μl ထက်မနည်းသော ညွှန်ကြားချက်တွင် လိုအပ်သည့်အတိုင်း မျိုးဗီဇ DNA မှော်ထုတ်ခြင်းအတွက် eluent ကို အသုံးပြုပါ။
မျိုးရိုးဗီဇ DNA သီးခြားခွဲထုတ်ထားသော သန့်စင်မှုနည်းသည်။
မျိုးဗီဇ DNA သန့်စင်မှုနည်းခြင်းသည် ရေအောက်ပိုင်းစမ်းသပ်မှုများ၏ ပျက်ကွက်ခြင်း သို့မဟုတ် ကျေနပ်ဖွယ်ရလဒ်များကို ဖြစ်ပေါ်စေနိုင်သည်- အင်ဇိုင်းများကို ဖွင့်မဖြတ်နိုင်ပါ၊ PCR သည် စိတ်ဝင်စားဖွယ်မျိုးရိုးဗီဇအပိုင်းအစများကို မရရှိနိုင်ခြင်း စသည်ဖြင့်၊
ဖြစ်နိုင်သော အကြောင်းအရင်းများမှာ အောက်ပါအတိုင်းဖြစ်သည်။
1. Heteroprotein pollution, RNA ညစ်ညမ်းမှု။
ဆန်းစစ်ချက်- Buffer PW ကို အသုံးပြု၍ သန့်စင်သောကော်လံကို မဆေးကြောပါ။Buffer PW ဆေးကြောသန့်စင်သည့်ကော်လံကို မှန်ကန်သော centrifugal အမြန်နှုန်းဖြင့် ဆေးကြောခြင်းမပြုပါ။
အကြံပြုချက်- အီသနောမထည့်မီ supernatant တွင် မိုးရွာသွန်းခြင်းမရှိကြောင်း သေချာပါစေ။ညွှန်ကြားချက်အတိုင်း သန့်စင်သောကော်လံကို သေချာဆေးကြောပါ၊ ဤအဆင့်ကို ချန်လှပ်၍မရပါ။
2. Impurity အိုင်းယွန်း ညစ်ညမ်းမှု။
ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်း- Buffer WB ဆေးကြောသန့်စင်သည့်ကော်လံကို ချန်လှပ်ထားခြင်း သို့မဟုတ် တစ်ကြိမ်သာ ဆေးကြောခြင်းဖြစ်ပြီး ကျန်ရှိသော ionic ညစ်ညမ်းမှုကို ဖြစ်စေသည်။
အကြံပြုချက်- ကျန်ရှိသော အိုင်းယွန်းများကို တတ်နိုင်သမျှ ဖယ်ရှားရန် Buffer WB ကို ညွှန်ကြားထားသည့်အတိုင်း ၂ ကြိမ် သေချာဆေးကြောပါ။
3. RNA အင်ဇိုင်းညစ်ညမ်းခြင်း။
ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်း- နိုင်ငံခြား RNases များကို ကြားခံတွင် ထည့်သွင်းထားသည်။Buffer PW ဆေးကြောခြင်း လုပ်ဆောင်ချက်သည် မှားယွင်းနေသောကြောင့် RNase အကြွင်းအကျန်များကို ဖြစ်ပေါ်စေပြီး vitro မှတ်တမ်းရေးခြင်းကဲ့သို့သော downstream RNA စမ်းသပ်လုပ်ဆောင်မှုများကို ထိခိုက်စေပါသည်။
အကြံပြုချက်- Foregene series nucleic acid isolation kits များသည် RNase ၏ ထပ်လောင်းမထည့်ဘဲ RNA ကို ဖယ်ရှားနိုင်သည်၊ ထို့ကြောင့် buccal Swab/FTA Card DNA Isolation Kit သည် RNase ထည့်ရန်မလိုအပ်ပါ။Buffer PW ဆေးကြောသန့်စင်ကော်လံအတွက် ညွှန်ကြားချက်များကို သေချာလိုက်နာပါ၊ ဤအဆင့်ကို ချန်လှပ်၍မရပါ။
4. Ethanol အကြွင်းအကျန်။
ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်း- Buffer WB သည် သန့်စင်သောကော်လံကို ဆေးကြောပြီးနောက် ပိုက်အလွတ် centrifugation ကို မလုပ်ဆောင်ခဲ့ပါ။
အကြံပြုချက်- ညွှန်ကြားချက်များနှင့်အညီ မှန်ကန်သော ပြွန်ဗလာ centrifugation လုပ်ဆောင်မှုကို လုပ်ဆောင်ပါ။
5. အခြားညစ်ညမ်းညစ်ညမ်း။
ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်း- သိမ်းဆည်းထားသော နမူနာများ သို့မဟုတ် အထူးနမူနာများကို ကြိုတင်ပြင်ဆင်ထားခြင်းမရှိပါ။
အကြံပြုချက်- ညွှန်ကြားထားသည့်အတိုင်း နမူနာကို စေ့စေ့စပ်စပ် ကြိုစားပါ။