အောက်ပါ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းအတွက် ဖြစ်နိုင်သော ပြဿနာများBuccalswab/FTA card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

သန့်စင်ရေးကော်လံ ပိတ်ဆို့နေသည်။

ဤကိရိယာအစုံတွင်၊ မျိုးရိုးဗီဇ DNA ထုတ်ယူခြင်းလုပ်ငန်းတွင်၊ သန့်စင်သောကော်လံကို စင်ထရီဖဂတ်ရှင်းအဆင့်မပါပဲ နမူနာအင်ဇိုင်းအရောအနှောပေါ်တွင် တိုက်ရိုက်စုပ်ယူထားပြီး နမူနာ၏အင်ဇိုင်းမပြည့်မီမှုနှင့် မြင့်မားသော viscosity ကြောင့် သန့်စင်ရေးကော်လံကို ပိတ်ဆို့သွားနိုင်သည်။

အောက်ပါ ဖြစ်နိုင်သော အကြောင်းအရင်းများမှာ အောက်ပါအတိုင်း ဖြစ်ပါသည်။

1. တစ်ရှူးနမူနာများ၏ အင်ဇိုင်းမပြည့်မီသော အစာခြေခြင်း။

အကြံပြုချက်- Foregene Protease ၏နမူနာလုပ်ဆောင်ချိန်ကို သင့်လျော်စွာ တိုးချဲ့နိုင်သည် သို့မဟုတ် 12,000 rpm တွင် centrifugation ပြီးနောက် supernatant ကိုယူနိုင်သည် (~13,400× ဆ) ၅ မိနစ်။

2. တစ်ရှူးနမူနာ သို့မဟုတ် ကြီးမားသောတစ်ရှူးများကို အလွန်အကျွံအသုံးပြုခြင်း။

အကြံပြုချက်- 1 ထက်မပိုစေရန် အကောင်းဆုံးဖြစ်သည်။Buccal နမူနာအတွက် swab;နမူနာသည် အလွန်ကြီးမားပါက Buffer ST1၊ Foregene Protease၊ ကြားခံ ST2 ၏ ပမာဏကို တိုးမြှင့်ပါ။

3. နမူနာ viscosity မြင့်မားလွန်းသည်။

အကြံပြုချက်- နမူနာများကို မျိုးရိုးဗီဇ DNA မထုတ်ယူမီ Tris-HCl ၏ 10 mM ဖြင့် သင့်လျော်စွာ ရောနှောနိုင်သည်။

4. သွေးကဒ်အပိုင်းအစများကို စုတ်ယူလိုက်ပါပြီ။

အကြံပြုချက်- သွေးကွက် (FTA Card) မျိုးရိုးဗီဇထုတ်ယူခြင်း အဆင့် 6 ၏ ယာယီဗဟိုချုပ်ကိုင်မှုအချိန်ကို သင့်လျော်စွာ သက်တမ်းတိုးနိုင်ပါသည်။

အထွက်နှုန်းနည်းသော သို့မဟုတ် DNA မရှိပါ။

နမူနာဇာစ်မြစ်၊ နမူနာသိုလှောင်မှုအခြေအနေ၊ နမူနာပြင်ဆင်မှု၊ ခြယ်လှယ်မှုစသည်ဖြင့် မျိုးဗီဇ DNA အထွက်နှုန်းကို ထိခိုက်စေသည့် အကြောင်းရင်းများစွာ ရှိတတ်သည်။

ထုတ်ယူနေစဉ်အတွင်း မျိုးဗီဇ DNA မရပါ။

ဖြစ်နိုင်သော အကြောင်းအရင်းများမှာ အောက်ပါအတိုင်းဖြစ်သည်။

1. နမူနာများ သို့မဟုတ် သိုလှောင်မှုအား အချိန်ကြာမြင့်စွာ မှားယွင်းစွာ ထိန်းသိမ်းခြင်းသည် မျိုးဗီဇ DNA ပျက်စီးခြင်းသို့ ဦးတည်စေသည်။

အကြံပြုချက်- ခံတွင်းစုတ်တံများကို လတ်ဆတ်စွာနမူနာယူသင့်ပြီး မျိုးရိုးဗီဇ DNA ထုတ်ယူခြင်းလုပ်ငန်းများအတွက် ထိန်းသိမ်းထားသော swabs များကို အသုံးပြုရန် မအကြံပြုလိုပါ။သွေးအစက်အပြောက်နမူနာများသည် အရည်အသွေးပြည့်မီကြောင်းနှင့် သိုလှောင်ချိန်သည် အလွန်ရှည်သင့်သည်ဟု သေချာစေသင့်သည်။

2. တစ်သျှူးအနည်းငယ်သာအသုံးပြုခြင်းသည် သက်ဆိုင်ရာ genomic DNA ကို ထုတ်ယူခြင်းမရှိစေပါ။

အကြံပြုချက်- ကိုလိုက်နာပါ။buccal ခွဲစိတ်မှုလမ်းညွှန်ရှိ swab sampling ညွှန်ကြားချက်များကို တတ်နိုင်သမျှ အကြိမ်ပေါင်းများစွာ သုတ်ပါ၊ သို့မှသာ မျိုးဗီဇထုတ်ယူမှုအတွက် လုံလောက်သောဆဲလ်များကို ပါးစပ် swab တွင် တွဲထားနိုင်စေရန်၊သွေးကွက်နမူနာထုတ်ယူခြင်းအတွက်၊ သွေးကွက်ဖြတ်ခြင်းဧရိယာကို သင့်လျော်စွာ တိုးမြှင့်နိုင်သည်။

3. Foregene Protease ကို မှားယွင်းစွာ ထိန်းသိမ်းထားသောကြောင့် ၎င်း၏ လုပ်ဆောင်ချက် သို့မဟုတ် အသက်မဝင်ခြင်းကို လျော့နည်းစေသည်။

အကြံပြုချက်- သိုလှောင်မှုအခြေအနေများကို အတည်ပြုပါ။Foregene Protease သို့မဟုတ် အင်ဇိုင်းတုံ့ပြန်မှုအတွက် Foregene Protease အသစ်ဖြင့် အစားထိုးပါ။

4. ကိရိယာအစုံ၏ မမှန်ကန်သော ထိန်းသိမ်းမှု သို့မဟုတ် သိုလှောင်ချိန်သည် ရှည်လျားလွန်းသဖြင့် အစုံလိုက်အတွင်းရှိ အစိတ်အပိုင်းအချို့ ပျက်စီးသွားစေသည်။

အကြံပြုချက်- အသစ်ဝယ်ပါ။Buccal swab DNAသီးသန့်ထားခြင်း၊ ခွဲထားခြင်း ဆက်စပ်လုပ်ထုံးလုပ်နည်းများအတွက်အစုံ။

5. Buffer WB သည် အကြွင်းမဲ့ အီသနော မထည့်ပါ။

အကြံပြုချက်- ကြားခံ WB သည် အကြွင်းမဲ့ အီသနော၏ မှန်ကန်သော ပမာဏကို ထည့်သွင်းကြောင်း အတည်ပြုပါ။

6. သာလွန်ကောင်းမွန်မှုသည် ဆီလီကွန်ဖလင်သို့ မှန်ကန်စွာထည့်မထားပါ။

အကြံပြုချက်- 65 ကိုထည့်ပါ။°Cpre- warmed eluent သည် ဆီလီကွန်အမြှေးပါးအလယ်သို့ ကျဆင်းသွားပြီး elution ထိရောက်မှုကို တိုးမြှင့်ရန်အတွက် အခန်းအပူချိန်တွင် 5 မိနစ်ခန့်ထားလိုက်ပါ။

Lမျိုးရိုးဗီဇ DNA အထွက်နှုန်း အထီးကျန်

အောက်ပါ ဖြစ်နိုင်သော အကြောင်းအရင်းများမှာ အောက်ပါအတိုင်း ဖြစ်ပါသည်။

1. နမူနာများ သို့မဟုတ် သိုလှောင်မှုအား အချိန်ကြာမြင့်စွာ မှားယွင်းစွာ ထိန်းသိမ်းခြင်းသည် မျိုးဗီဇ DNA ပျက်စီးခြင်းသို့ ဦးတည်စေသည်။

အကြံပြုချက်- ခံတွင်းစုတ်တံများကို လတ်ဆတ်စွာနမူနာယူထားပြီး မျိုးရိုးဗီဇ DNA ထုတ်ယူရန်အတွက် ထိန်းသိမ်းထားသော swab များကို အသုံးမပြုသင့်ပါ။

2. တစ်ရှူးနမူနာပမာဏသည် အလွန်သေးငယ်ပါက၊ ထုတ်ယူထားသော မျိုးရိုးဗီဇ DNA ပါဝင်မှု လျော့နည်းမည်ဖြစ်သည်။

အကြံပြုချက်- မျိုးရိုးဗီဇ DNA ထုတ်ယူမှုအတွက် လုံလောက်သောဆဲလ်များကို ပါးစပ် swab တွင် ကပ်ထားနိုင်စေရန် လည်ပတ်မှုလမ်းညွှန်ရှိ ပါးစပ်နမူနာနမူနာလမ်းညွှန်ချက်များကို လိုက်နာပါ

3. Foregene Protease ကို မှားယွင်းစွာ ထိန်းသိမ်းထားသောကြောင့် ၎င်း၏ လုပ်ဆောင်ချက် သို့မဟုတ် အသက်မဝင်ခြင်းကို လျော့နည်းစေသည်။

အကြံပြုချက်- သိုလှောင်မှုအခြေအနေများကို အတည်ပြုပါ။the Foregene Protease သို့မဟုတ် ၎င်းကို အသစ်ဖြင့် အစားထိုးပါ။ အင်ဇိုင်းတုံ့ပြန်မှုအတွက် Foregene Protease ။

4. Eluent ပြဿနာများ။

အကြံပြုချက်- elution အတွက် Buffer EB ကိုသုံးပါ။ddH ကိုသုံးရင်₂အို သို့မဟုတ် အခြားအရာများ ၊ eluate ၏ pH သည် 7.0 မှ 8.5 ကြားဖြစ်ကြောင်း အတည်ပြုပါ။

5. eluate သည် dropwise ဖြင့် မှန်ကန်စွာ ထည့်ထားခြင်းမရှိပါ။

အကြံပြုချက်- ဆီလီကွန်အမြှေးပါး၏အလယ်တွင် ထင်ရှားသောအစက်များထည့်ကာ အလင်းပြန်မှုအားကောင်းစေရန် အခန်းအပူချိန်တွင် 5 မိနစ်ခန့်ထားပါ။

6. elution အရည်သည် အလွန်နည်းပါသည်။

အကြံပြုချက်- အနည်းဆုံး ညွှန်ကြားချက်တွင် လိုအပ်သလို မျိုးရိုးဗီဇ DNA ကောက်ကြောင်းအတွက် သာလွန်ကောင်းမွန်မှုကို အသုံးပြုပါမနည်း 15 ထက်μl.

Lအိုး သန့်ရှင်းမှု of မျိုးဗီဇ DNAအထီးကျန်

မျိုးဗီဇ DNA သန့်စင်မှုနည်းခြင်းသည် ရေအောက်ပိုင်းစမ်းသပ်မှုများ၏ ပျက်ကွက်ခြင်း သို့မဟုတ် ကျေနပ်ဖွယ်ရလဒ်များကို ဖြစ်ပေါ်စေနိုင်သည်- အင်ဇိုင်းများကို ဖွင့်မဖြတ်နိုင်ပါ၊ PCR သည် စိတ်ဝင်စားဖွယ်မျိုးရိုးဗီဇအပိုင်းအစများကို မရရှိနိုင်ခြင်း စသည်ဖြင့်၊

ဖြစ်နိုင်သော အကြောင်းအရင်းများမှာ အောက်ပါအတိုင်းဖြစ်သည်။

1. Heteroprotein pollution, RNA ညစ်ညမ်းမှု။

ဆန်းစစ်ချက်- Buffer PW ကို အသုံးပြု၍ သန့်စင်သောကော်လံကို မဆေးကြောပါ။Buffer PW ဆေးကြောသန့်စင်သည့်ကော်လံကို မှန်ကန်သော centrifugal အမြန်နှုန်းဖြင့် ဆေးကြောခြင်းမပြုပါ။

အကြံပြုချက်- အီသနောမထည့်မီ supernatant တွင် မိုးရွာသွန်းခြင်းမရှိကြောင်း သေချာပါစေ။ညွှန်ကြားချက်အတိုင်း သန့်စင်သောကော်လံကို သေချာဆေးကြောပါ၊ ဤအဆင့်ကို ချန်လှပ်၍မရပါ။

2. Impurity အိုင်းယွန်း ညစ်ညမ်းမှု။

ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်း- Buffer WB ဆေးကြောသန့်စင်သည့်ကော်လံကို ချန်လှပ်ထားခြင်း သို့မဟုတ် တစ်ကြိမ်သာ ဆေးကြောခြင်းဖြစ်ပြီး ကျန်ရှိသော ionic ညစ်ညမ်းမှုကို ဖြစ်စေသည်။

အကြံပြုချက်- ကျန်ရှိသော အိုင်းယွန်းများကို တတ်နိုင်သမျှ ဖယ်ရှားရန် Buffer WB ကို ညွှန်ကြားထားသည့်အတိုင်း ၂ ကြိမ် သေချာဆေးကြောပါ။

3. RNA အင်ဇိုင်းညစ်ညမ်းခြင်း။

ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်း- နိုင်ငံခြား RNases များကို ကြားခံတွင် ထည့်သွင်းထားသည်။Buffer PW ဆေးကြောခြင်း လုပ်ဆောင်ချက်သည် မှားယွင်းနေသောကြောင့် RNase အကြွင်းအကျန်များကို ဖြစ်ပေါ်စေပြီး vitro မှတ်တမ်းရေးခြင်းကဲ့သို့သော downstream RNA စမ်းသပ်လုပ်ဆောင်မှုများကို ထိခိုက်စေပါသည်။

အကြံပြုချက်- Foregene စီးရီး nucleic acidisolation kits များသည် RNase ထပ်တိုးခြင်းမရှိဘဲ RNA ကိုဖယ်ရှားနိုင်သည်၊ထို့ကြောင့် buccal Swab/FTA ကတ် DNA သီးခြားခွဲထုတ်ကိရိယာလိုအပ်သည်။'t RNase ထည့်ပါ။Buffer PW ဆေးကြောသန့်စင်ကော်လံအတွက် ညွှန်ကြားချက်များကို သေချာလိုက်နာပါ၊ ဤအဆင့်ကို ချန်လှပ်၍မရပါ။

4. Ethanol အကြွင်းအကျန်။

ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်း- Buffer WB သည် သန့်စင်သောကော်လံကို ဆေးကြောပြီးနောက် ပိုက်အလွတ် centrifugation ကို မလုပ်ဆောင်ခဲ့ပါ။

အကြံပြုချက်- ညွှန်ကြားချက်များနှင့်အညီ မှန်ကန်သော ပြွန်ဗလာ centrifugation လုပ်ဆောင်မှုကို လုပ်ဆောင်ပါ။

5. အခြားညစ်ညမ်းညစ်ညမ်း။

ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်း- သိမ်းဆည်းထားသော နမူနာများ သို့မဟုတ် အထူးနမူနာများကို ကြိုတင်ပြင်ဆင်ထားခြင်းမရှိပါ။

အကြံပြုချက်- ညွှန်ကြားထားသည့်အတိုင်း နမူနာကို စေ့စေ့စပ်စပ် ကြိုစားပါ။