ရိုးရာပြောင်းပြန်စာသားမှတ်တမ်းများသည် မြင့်မားသောအပူချိန်ကို သည်းမခံနိုင်ပါ (MMLV လုပ်ဆောင်ချက်အတွက် အကောင်းဆုံးအပူချိန်မှာ 37-50°C၊ နှင့် AMV သည် 42-60°C)။ပိုမိုရှုပ်ထွေးသော ဗိုင်းရပ်စ် RNA သည် အပူချိန်နိမ့်သောအချိန်တွင် cDNA သို့ ထိရောက်စွာ ပြောင်းပြန်လှန်၍ မရသောကြောင့် ထောက်လှမ်းမှု ထိရောက်မှု လျော့နည်းစေသည်။သမားရိုးကျ RT-qPCR သည် ယေဘုယျအားဖြင့် တုံ့ပြန်မှုစနစ်၏လည်ပတ်မှုကို ရိုးရှင်းစေပြီး ကုန်ကျစရိတ်ကို လျှော့ချရန် မဖြစ်နိုင်သော အဓိကအင်ဇိုင်းနှစ်ခု (ပြောင်းပြန် transcriptase နှင့် DNA polymerase) ၏ပါဝင်မှုကို လိုအပ်သည်။ဤနေရာတွင် ကျွန်ုပ်တို့သည် မြင့်မားသောအပူချိန်ခံနိုင်ရည်ရှိသော ပြောင်းပြန်စာသားမှတ်တမ်းနှစ်ခုဖြစ်သည့် TtH နှင့် RevTaq ကို မိတ်ဆက်ပေးပါမည်။ဤအင်ဇိုင်းနှစ်ခုသည် DNA polymerase ၏လုပ်ဆောင်ချက်လည်းပါသောကြောင့် ၎င်းတို့ကို bifunctional enzymes ဟုခေါ်သည်။

TtH DNA polymerase

သာမိုဖီလစ်ဘက်တီးရီးယား Thermus thermophilus HB8 မှဆင်းသက်လာသော TtH အကြောင်း သင်ကြားဖူးပေမည်။Mg2+ ကဲ့သို့သော divalent cations များရှေ့တွင်၊ ၎င်းတွင် DNA polymerase လုပ်ဆောင်မှုရှိသည်။၎င်းကို Taq အင်ဇိုင်းကဲ့သို့ PCR တုံ့ပြန်မှုများတွင် တွင်ကျယ်စွာအသုံးပြုသော်လည်း Taq အင်ဇိုင်းထက် အပူခံနိုင်ရည်ရှိသောကြောင့် ၎င်းသည် မြင့်မားသော GC ပါဝင်မှုပုံစံများပါရှိသော PCR တွင်လည်း ပိုမိုကောင်းမွန်သောအကျိုးသက်ရောက်မှုရှိသည်။

· ဤအင်ဇိုင်းသည် အခြေခံအားဖြင့် 3′→5′ exonuclease လုပ်ဆောင်ချက်နှင့် 5′→3′ exonuclease လုပ်ဆောင်ချက်မရှိသောကြောင့် ၎င်းကို dideoxy sequencing အတွက်လည်း အသုံးပြုနိုင်သည်။

· ဤအင်ဇိုင်းသည် RTase လုပ်ဆောင်ချက်ရှိသည်။Mn2+ တွင်၊ RTase လုပ်ဆောင်ချက်ကို မြှင့်တင်သွားပါမည်။ဤအင်္ဂါရပ်ကိုအသုံးပြုခြင်းဖြင့်၊ ၎င်းသည် တူညီသောပြွန်ထဲတွင် ကူးယူဖော်ပြခြင်းတုံ့ပြန်မှုနှင့် PCR တုံ့ပြန်မှုကို လုပ်ဆောင်ရန်၊ အဆင့်တစ်ဆင့် RT-PCR ဟုခေါ်သည်။သို့သော်၊ Mn2+ တွင်၊ RT-PCR ၏တိကျမှုသည် မမြင့်မားပါ။RT လုပ်ဆောင်ချက်သည် rnaase H လုပ်ဆောင်ချက်နှင့် ဘာမှမဆိုင်ပါ။

· Tth-DNA polymerase (pH9၊ အကောင်းဆုံး +55℃～+70℃၊ အမြင့်ဆုံး +95℃) သည် RNA အလယ်တန်းဖွဲ့စည်းပုံကြောင့် ဖြစ်ပေါ်လာသော ပြဿနာများကို ကျော်လွှားသည်။ရလဒ် cDNA ကို Mg2+ အိုင်းယွန်းများရှေ့တွင် တူညီသောအင်ဇိုင်းဖြင့် PCR မှ ချဲ့နိုင်သည်။

· Tth-DNA polymerase ၏ မြင့်မားသော အပူချိန်တွင် ပြောင်းပြန်ကူးယူခြင်းနှင့် DNA ချဲ့ထွင်ခြင်းတို့ကို လုပ်ဆောင်ရန် စွမ်းရည်သည် ဆဲလ်လူလာနှင့် ဗိုင်းရပ်စ် RNA ၏ အရေအတွက် RT-PCR၊ ပွားခြင်းနှင့် မျိုးဗီဇဖော်ပြမှုခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းအတွက် ဤအင်ဇိုင်းသည် အသုံးဝင်စေသည်။
· Tth-DNA polymerase ကို RNA 1kb အထိ ချဲ့ထွင်ရန် RT-PCR အတွက် အသုံးပြုသည်။

အင်္ဂါရပ်များနှင့်အားသာချက်များ

Tth DNA polymerase:

• RT-PCR တုံ့ပြန်မှုတွင် အနည်းဆုံး 1000 bp ထုတ်ကုန်အရွယ်အစား ပိုမိုကောင်းမွန်အောင်ပြုလုပ်ထားသော ပိုလီမာရတ်ကွင်းဆက်တုံ့ပြန်မှု (PCR) ကို သေချာစစ်ဆေးပါ။

• ပြုပြင်ထားသော deoxyribonucleoside triphosphate ကို အလွှာတစ်ခုအနေဖြင့် လက်ခံပါ။

• RNase H လုပ်ဆောင်ချက်နှင့် မသက်ဆိုင်ပါ။

• ပုံမှန်အားဖြင့် RNA တွင်ပါရှိသော မြင့်မားသောဒုတိယဖွဲ့စည်းပုံနှင့်ဆက်စပ်သော ပြဿနာများကို ကျော်လွှားရန် မြင့်မားသောအပူတည်ငြိမ်မှုရှိသည်။

RevTaq RT-PCR DNA polymerase

ပြောင်းပြန် transcriptase လုပ်ဆောင်ချက်ပါရှိသော အပူဒဏ်ခံနိုင်သော DNA polymerase

RevTaq-RT-PCR-DNA polymerase သည် အင်ဂျင်ပြောင်းပြန် transcriptase နှင့် DNA polymerase လုပ်ဆောင်မှုများပါရှိသော အင်ဂျင်နီယာ၊ မြင့်မားသော အပူခံနိုင်ရည်ရှိသော၊ နှစ်ခုမြောက် လုပ်ဆောင်နိုင်သော အင်ဇိုင်းတစ်ခုဖြစ်သည်။

· 95°C တွင် RevTaq RT-PCR DNA polymerase ၏တစ်ဝက်သက်တမ်းသည် မိနစ် 40 ထက်ကြီးသည်။

· RevTaq RT-PCR DNA polymerase သည် RNA နမူနာပုံစံမှ တိုက်ရိုက် အပူချိန်မြင့်သော ပြောင်းပြန် စာသားကို ခွင့်ပြုပြီး cDNA နမူနာများ ထပ်မံထုတ်လုပ်ရန် အကြိမ်များစွာ ထပ်ခါထပ်ခါ ပြုလုပ်နိုင်သည်။

· RevTaq RT-PCR DNA polymerase သည် "သုညအဆင့်" RT-PCR ( isothermal reverse transcription step ) ကိုခွင့်ပြုသည် ၊ အကြောင်းမှာ cyclic PCR တိုးချဲ့မှုအဆင့်တွင်၊ reverse transcription နှင့် DNA amplification သည် တစ်ပြိုင်နက်ဖြစ်ပေါ်ပါသည်။၎င်းသည် မြင့်မားသော အပူချိန်တွင် ပြောင်းပြန် ကူးယူတုံ့ပြန်မှုကိုလည်း မြှင့်တင်ပေးကာ မြင့်မားသော အပူချိန်တွင် RNA ရှိ ပြင်းထန်သော ဒုတိယဖွဲ့စည်းပုံအား အရည်ပျော်ရာတွင် ကြုံတွေ့ရသည့် ပြဿနာများကို လျော့နည်းစေသည်။

· Aptamer-based hot-start ဖော်မြူလာကြောင့်၊ RevTaq RT-PCR DNA polymerase သည် annealing နှင့် extension temperature 57°C ထက်ပိုမြင့်သောအခါတွင် ပိုမိုကောင်းမွန်သောရလဒ်များကို ထုတ်ပေးမည်ဖြစ်ပါသည်။

· အင်ဇိုင်းသည် အပူဒဏ်ခံနိုင်သောကြောင့်၊ အလွန်မြင့်မားသော အရည်ပျော်မှတ်များ (>60°C) ဖြင့် primers နှင့် probes များကို ဒီဇိုင်းရေးဆွဲရန် အကြံပြုထားသည်။

· တုံ့ပြန်မှုထည့်သွင်းခြင်းလုပ်ငန်းစဉ်အတွင်း အပူချိန် gradient မှတဆင့် annealing/extension အဆင့်၏အပူချိန်ကို ပိုကောင်းအောင်ပြုလုပ်ရန် အကြံပြုထားသည်။

· အပူချိန်မြင့်လေ၊ PCR ၏ တိကျမှု မြင့်မားလေဖြစ်သည်။အဘယ်ကြောင့်ဆိုသော် DNA Primer:RNA Template ပေါင်းစပ်ခြင်းတွင် အများအားဖြင့် DNA Primer:cDNA Template duplex ထက် အရည်ပျော်မှတ်ပိုများသောကြောင့်၊ ပြောင်းပြန် ကူးယူခြင်းစက်ဝန်းကို PCR လည်ပတ်မှုထက် ပိုမိုမြင့်မားသော အပူချိန်တွင် လုပ်ဆောင်ပါသည်။

· RevTaq RT-PCR DNA polymerase သည် မျိုးဗီဇဆိုင်ရာ အင်ဂျင်နီယာနှင့် ပိုမိုကောင်းမွန်အောင်ပြုလုပ်ထားပြီး amplicon အရွယ်အစားသည် 60-300 bp ကြားဖြစ်သည်။

RevTaq RT-PCR DNA polymerase ထောက်လှမ်းမှု ကန့်သတ်ချက်သည် 4 မိတ္တူသို့ ရောက်ရှိသည်/

အကောင်းဆုံးတုံ့ပြန်မှုစနစ် (မြင့်မားသော အရည်ပျော်မှတ် primers များတည်ဆောက်ခြင်း) ကို ပုံတွင်ပြထားသည်။RevTaq RT-PCR DNA polymerase-driven RT-PCR သည် TaqPath 1-step RT-qPCR master mix ထက် ပိုမိုကောင်းမွန်သော sensitivity ကိုပြသပြီး၊ နှင့် low detection Sample dilution gradient ။

နောက်ထပ်အားသာချက်များ

အမြန်စတင်ခြင်း လုပ်ဆောင်ချက် → ကနဦး အပူလွန်ကဲခြင်း အဆင့်ကို ကျော်သွားနိုင်သည်။

Hot-start aptamer ဖော်မြူလာ → 100% အင်ဇိုင်းလုပ်ဆောင်ချက်ကို ချက်ချင်းပေး၍ အပူချိန်နိမ့်သော (<57°C) တွင် သီးခြားမဟုတ်သော ချဲ့ထွင်မှုကို တားဆီးပါ။

Cleavage လုပ်ဆောင်ချက် → RNA ထုတ်ယူခြင်းအဆင့်ကို ချန်လှပ်ထားပါသည်၊ အကြောင်းမှာ RevTaq RT-PCR DNA polymerase သည် ကြမ်းတမ်းသောတုံ့ပြန်မှုနမူနာများကို လုပ်ဆောင်နိုင်သောကြောင့်ဖြစ်သည်။၎င်းသည် ပူပြင်းသော RT-PCR စက်ဝန်းတွင် ယူကရီယို၊ ဘက်တီးရီးယားနှင့် ဗိုင်းရပ်စ်များ၏ ဆဲလ်အမြှေးပါးများကို ချက်ချင်းဖျက်ဆီးနိုင်သည်။

IVD ကုန်ကြမ်းအဆင့် → အရည်အသွေးမြင့် စံချိန်စံညွှန်းများနှင့် အလွန်အမင်း ယှဉ်ပြိုင်နိုင်သော ဈေးနှုန်းများ