ပြဿနာခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းလမ်းညွှန်

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

အထွက်နှုန်းနည်းသော သို့မဟုတ် DNA မရှိပါ။

နမူနာ၏ရင်းမြစ်၊ နမူနာ၏အသက်၊ နမူနာ၏သိုလှောင်မှုအခြေအနေများနှင့် လည်ပတ်မှုတို့အပါအဝင် မျိုးဗီဇ DNA ၏အထွက်နှုန်းကို ထိခိုက်စေသည့် အကြောင်းရင်းများစွာရှိပါသည်။

ထုတ်ယူနေစဉ်အတွင်း မျိုးရိုးဗီဇ DNA မရနိုင်ပါ။

1. တစ်သျှူးနမူနာများကို မဖွယ်မရာ သိမ်းဆည်းခြင်း သို့မဟုတ် ကြာရှည်စွာ သိမ်းဆည်းထားခြင်းသည် မျိုးဗီဇ DNA ၏ ပျက်စီးယိုယွင်းမှုကို ဖြစ်စေသည်။

အကြံပြုချက်- တစ်ရှူးနမူနာများကို နိုက်ထရိုဂျင်အရည် သို့မဟုတ် -20 တွင် သိမ်းဆည်းပါ။°C;မျိုးရိုးဗီဇ DNA ထုတ်ယူမှုအတွက် အသစ်စုဆောင်းထားသော နမူနာများကို အသုံးပြုရန် ကြိုးစားပါ။

2. နမူနာပမာဏ နည်းပါးလွန်းပါက သက်ဆိုင်ရာ genomic DNA ကို မထုတ်ယူနိုင်ပါ။

အကြံပြုချက်- အချိန်ကြာမြင့်စွာ သိမ်းဆည်းထားသော သို့မဟုတ် ပြင်းထန်သော မျိုးဗီဇ DNA ပျက်စီးမှုရှိသော တစ်ရှူးနမူနာများအတွက်၊ စဉ်းစားဆင်ခြင်စရာ genomic DNA ထုတ်ယူရန်အတွက် တစ်ရှူးနမူနာများ၏ ပမာဏကို သင့်လျော်စွာ တိုးမြှင့်နိုင်သည်။နမူနာ၏ပမာဏကို DNA လိုအပ်ချက်အရ ဆုံးဖြတ်နိုင်သော်လည်း လတ်ဆတ်သောနမူနာသည် 100mg ထက်မပိုသင့်ဘဲ အခြောက်နမူနာသည် 30mg ထက်မပိုသင့်ပါ။

3. နမူနာအား နိုက်ထရိုဂျင်အရည်ဖြင့် မြေမထားပါ။ သို့မဟုတ် နိုက်ထရိုဂျင်အရည်ပြီးနောက် အကြာကြီးထားထားပါ။

အကြံပြုချက်- DNA ထုတ်ယူစဉ်တွင်၊ နမူနာအား ဆဲလ်နံရံကို ချိုးဖျက်ရန်အတွက် နိုက်ထရိုဂျင်အရည်ဖြင့် မြေသားပြည့်နေရန် လိုအပ်ပါသည်။ကြိတ်ပြီးနောက်၊ နမူနာအမှုန့်ကို 65 တွင်ကြိုတင်အပူပေးထားသော PL1 သို့လွှဲပြောင်းပေးပါ။°C သည် အမြန်ဆုံး (မြေမှုန့် အရည်ပျော်ပြီးသည်နှင့်၊ မျိုးဗီဇ DNA သည် လျင်မြန်စွာ ဆုတ်ယုတ်သွားလိမ့်မည်)။

4. Foregene Protease ကို မှားယွင်းစွာ သိမ်းဆည်းခြင်းသည် လုပ်ဆောင်ချက် လျော့နည်းခြင်း သို့မဟုတ် မလှုပ်ရှားခြင်းတို့ကို ဖြစ်စေသည်။

အကြံပြုချက်- Foregene Protease ၏ သိုလှောင်မှုအခြေအနေများကို အတည်ပြုပါ သို့မဟုတ် ၎င်းအား အင်ဇိုင်းဓာတ်အားဖြည့်ခြင်းအတွက် Foregene Protease အသစ်ဖြင့် အစားထိုးပါ။

5. ကိရိယာအစုံကို မှားယွင်းစွာသိမ်းဆည်းခြင်း သို့မဟုတ် အကြာကြီးသိမ်းဆည်းထားခြင်းကြောင့် အစုံလိုက်အတွင်းရှိ အစိတ်အပိုင်းအချို့ ပျက်စီးသွားစေသည်။

အကြံပြုချက်- ဆက်စပ်လုပ်ငန်းများအတွက် အပင်မျိုးရိုးဗီဇ DNA ထုတ်ယူသည့်ကိရိယာအသစ်ကို ဝယ်ယူပါ။

6. ပစ္စည်းကိရိယာကို မှားယွင်းစွာအသုံးပြုခြင်း။

အကြံပြုချက်- အပင်မျိုးဗီဇ DNA ကို ထုတ်ယူရန်နှင့် သန့်စင်ရန်အတွက် နမူနာများအတွက် ရည်စူးထားသော Plant DNA Isolation Kit တစ်ခုကို ဝယ်ယူပါ။

7. Buffer WB ကို မထည့်ဘဲရေဓာတ်မပြည့်ဝသော အီသနော။

အကြံပြုချက်- အကြွင်းမဲ့ အီသနော၏ မှန်ကန်သော ပမာဏကို Buffer WB သို့ ထည့်ကြောင်း သေချာပါစေ။

8. သာလွန်ကောင်းမွန်မှုသည် ဆီလီကာအမြှေးပါးပေါ်သို့ မှန်ကန်စွာ စိမ့်မ၀င်ခဲ့ပါ။

အကြံပြုချက်- 65 တွင်ကြိုတင်အပူပေးထားသောပစ္စည်းကိုထည့်ပါ။℃ဆီလီကာဂျယ်အမြှေးပါး၏ အလယ်သို့ အစက်ချ၍ အလင်းပြန်မှု အားကောင်းစေရန် အခန်းအပူချိန်တွင် ၅ မိနစ်ခန့် ထားလိုက်ပါ။

အထွက်နှုန်းနည်းသော မျိုးရိုးဗီဇ DNA ရရှိရန် ထုတ်ယူခြင်း။

1. နမူနာအား မဖွယ်မရာ သိမ်းဆည်းခြင်း သို့မဟုတ် အချိန်ကြာမြင့်စွာ သိမ်းဆည်းထားခြင်းသည် မျိုးဗီဇ DNA ၏ ပျက်စီးယိုယွင်းမှုကို ဖြစ်စေသည်။

အကြံပြုချက်- တစ်ရှူးနမူနာများကို -20 တွင် သိမ်းဆည်းပါ။℃;မျိုးရိုးဗီဇ DNA ထုတ်ယူမှုအတွက် အသစ်စုဆောင်းထားသော တစ်ရှူးနမူနာများကို အသုံးပြုရန် ကြိုးစားပါ။

2. တစ်ရှူးနမူနာများ၏ ပမာဏသည် အလွန်သေးငယ်ပါက၊ ထုတ်ယူထားသော မျိုးရိုးဗီဇ DNA လျော့နည်းသွားမည်ဖြစ်သည်။

အကြံပြုချက်- အချို့သောအပင်နမူနာများသည် ရေဓာတ်ကြွယ်ဝသော ရေနေအပင်များဖြစ်သည့် ရေညှိများကဲ့သို့သော ရေတွင်ပါရှိပြီး ဆေးပမာဏကို သင့်လျော်သလို တိုးပေးနိုင်သည် သို့မဟုတ် လုပ်ငန်းမစမီတွင် ရေအနည်းငယ် ခမ်းခြောက်သွားနိုင်သည်။

3. နမူနာများကို နိုက်ထရိုဂျင်အရည်ဖြင့် နှိုက်နှိုက်ချွတ်ချွတ် မကြေမွဘဲ သို့မဟုတ် ကြိတ်ပြီးနောက် အခန်းအပူချိန်တွင် အကြာကြီးထားခဲ့ပါ။

အကြံပြုချက်- နိုက်ထရိုဂျင်အရည်ကို ကြိတ်ချေရာတွင် လုံလောက်စွာ လိုအပ်ပြီး နမူနာဆဲလ်နံရံကို တတ်နိုင်သမျှ ချိုးသင့်သည်၊ကြိတ်ပြီးနောက်ချက်ချင်း၊ နမူနာအမှုန့်ကို 65 သို့လွှဲပြောင်းသင့်သည်။℃နောက်တစ်ဆင့်အတွက် Buffer PL1 ကို အပူပေးထားသည်။

4. မှန်ကန်သော ကိရိယာကို မသုံးပါ။

အကြံပြုချက်- အပင်မျိုးရိုးဗီဇ DNA ကို ထုတ်ယူရန်နှင့် သန့်စင်ရန်အတွက် သီးသန့် DNA သီးခြားကိရိယာကို အသုံးပြုပါ။

5. Foregene Protease ကို မှားယွင်းစွာ သိမ်းဆည်းခြင်းသည် လုပ်ဆောင်ချက် လျော့နည်းခြင်း သို့မဟုတ် မလှုပ်ရှားခြင်းတို့ကို ဖြစ်စေသည်။

အကြံပြုချက်- Foregene Protease ၏ သိုလှောင်မှုအခြေအနေများကို အတည်ပြုပါ သို့မဟုတ် ၎င်းအား အင်ဇိုင်းဓာတ်အားဖြည့်ခြင်းအတွက် Foregene Protease အသစ်ဖြင့် အစားထိုးပါ။

6. Eluent ပြဿနာ

အကြံပြုချက်- elution အတွက် Buffer EB ကိုသုံးပါ။ddH ကိုသုံးရင်₂အို သို့မဟုတ် အခြားအရာများ ၊ ဓာတ်ပစ္စည်း၏ pH သည် 7.0 မှ 8.5 ကြားဖြစ်ကြောင်း သေချာပါစေ။

7. ဂုဏ်ကျေးဇူးသည် မှန်ကန်စွာ ယိုယွင်းခြင်းမရှိပါ။

အကြံပြုချက်- ကျေးဇူးပြု၍ ဆီလီကာအမြှေးပါးအလယ်တွင် elution drop ကိုထည့်ကာ elution ထိရောက်မှုကို တိုးမြင့်စေရန် ၅ မိနစ်ခန့် အခန်းအပူချိန်တွင် ထားလိုက်ပါ။

8. ထင်ရှားသော ထုထည်သည် သေးငယ်လွန်းသည်။

အကြံပြုချက်- ညွှန်ကြားချက်အရ အနည်းဆုံး 100 ထက်မနည်းသော မျိုးရိုးဗီဇ DNA အသွင်အပြင်အတွက် သာလွန်ကောင်းမွန်မှုကို အသုံးပြုပါ။μl.

သန့်စင်မှုနည်းသော မျိုးဗီဇ DNA ကို ထုတ်ယူသည်။

မျိုးဗီဇ DNA ၏ သန့်စင်မှုနည်းခြင်းသည် ရေအောက်ပိုင်းစမ်းသပ်မှုများ၏ ပျက်ကွက်ခြင်း သို့မဟုတ် ညံ့ဖျင်းသောအကျိုးသက်ရောက်မှုကို ဖြစ်စေသည်- အင်ဇိုင်းကို ဖြတ်တောက်၍မရသည့်အပြင် ပစ်မှတ်မျိုးရိုးဗီဇအပိုင်းအစကို PCR မှမရနိုင်ပါ။

1. Miscellaneous protein contamination, RNA ညစ်ညမ်းခြင်း။

ဆန်းစစ်ချက်- ကော်လံကို ဆေးကြောရန်အတွက် Buffer PW ကို အသုံးမပြုပါ။မှန်ကန်သော centrifugation speed ဖြင့် ကော်လံကို ဆေးကြောရန်အတွက် Buffer PW ကို အသုံးမပြုပါ။

အကြံပြုချက်- supernatant ကော်လံကို ဖြတ်သွားသောအခါ supernatant တွင် မိုးရွာသွန်းခြင်းမရှိကြောင်း သေချာအောင်ကြိုးစားပါ။ညွှန်ကြားချက်အတိုင်း Buffer PW ဖြင့် သန့်စင်သောကော်လံကို သေချာဆေးကြောပါ၊ ဤအဆင့်ကို ချန်လှပ်၍မရပါ။

2. Impurity အိုင်းယွန်း ညစ်ညမ်းမှု။

ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်း- Buffer WB ဆေးကော်လံကို ချန်လှပ်ထားခြင်း သို့မဟုတ် တစ်ကြိမ်သာ ဆေးကြောခြင်းဖြစ်ပြီး ကျန်ရှိသော အိုင်ယွန်ညစ်ညမ်းမှုကို ဖြစ်ပေါ်စေသည်။

အကြံပြုချက်- ကျန်နေသော အိုင်းယွန်းများကို တတ်နိုင်သမျှ ဖယ်ရှားရန် ညွှန်ကြားချက်များအတိုင်း Buffer WB ဖြင့် နှစ်ကြိမ် ဆေးကြောရန် သေချာပါစေ။

3. RNase ညစ်ညမ်းခြင်း။

ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်း- Exogenous RNase ကို Buffer တွင် ထည့်သွင်းထားသည်။Buffer PW တွင် မမှန်ကန်သော ဆေးကြောခြင်း လုပ်ဆောင်ချက်သည် ကျန်ရှိသော RNase ကို ဖြစ်ပေါ်စေပြီး in vitro transcription ကဲ့သို့သော downstream RNA စမ်းသပ်လုပ်ဆောင်မှုများကို ထိခိုက်စေပါသည်။

အကြံပြုချက်- Foregene series nucleic acid ထုတ်ယူသည့်ကိရိယာများသည် အပို RNase မလိုအပ်ဘဲ RNA ကိုဖယ်ရှားနိုင်ပြီး Plant DNA Isolation Kit ရှိ ဓာတ်ပစ္စည်းများအားလုံး RNase မလိုအပ်ပါ။ညွှန်ကြားချက်အတိုင်း Buffer PW ဖြင့် သန့်စင်သောကော်လံကို သေချာဆေးကြောပါ၊ ဤအဆင့်ကို ချန်လှပ်၍မရပါ။

4. Ethanol အကြွင်းအကျန်များ။

ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာချက်- Buffer WB ဖြင့် သန့်စင်သောကော်လံကို ဆေးကြောပြီးနောက်၊ အချည်းနှီးသော tube centrifugation ပြုလုပ်ခြင်း မရှိပါ။

အကြံပြုချက်- သင့်လျော်သော ဗလာပြွန် centrifugation အတွက် ညွှန်ကြားချက်များကို လိုက်နာပါ။

ညွှန်ကြားချက်လက်စွဲ-

Plant DNA Isolation Kit ညွှန်ကြားချက်လက်စွဲ