ပြဿနာခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းလမ်းညွှန်

သင်ကြုံတွေ့ရနိုင်သော ပြဿနာများကို အောက်ပါအတိုင်း ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာပါ။စုစုပေါင်းစိုက်RNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

လှည့်ပတ်ကော်လံ ပိတ်ဆို့နေသည်။

လှည့်ပတ်ကော်လံကို ပိတ်ဆို့ခြင်းသည် RNA အထွက်နှုန်းကို လျော့ကျစေသည် သို့မဟုတ် သန့်စင်ရန်ပင် မဖြစ်နိုင်တော့ဘဲ၊ ရရှိသော RNA ၏ အရည်အသွေး နိမ့်ပါးသွားမည်ဖြစ်သည်။

အဖြစ်များသောအကြောင်းရင်းကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်း-

1. နမူနာသည် လုံးလုံးမကွဲပါ။

မပြည့်စုံသောနမူနာခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းသည် RNA အထွက်နှုန်းနှင့် အရည်အသွေးကို ထိခိုက်စေနိုင်သည့် DNA-သန့်ရှင်းရေးကော်လံကို ပိတ်ဆို့နိုင်သည်။နမူနာကွဲထွက်ခြင်းကို လုပ်ဆောင်သောအခါ၊ နမူနာ၏ ဆဲလ်နံရံများနှင့် ဆဲလ်အမြှေးပါးများကဲ့သို့သော တစ်ရှူးများကို တတ်နိုင်သမျှ ဖြိုခွဲရန် လုံလောက်သော နိုက်ထရိုဂျင်အရည်ပမာဏကို အမြန်ကြိတ်ရန် အကြံပြုအပ်ပါသည်။polyphenol polysaccharides ၏ အပင်နမူနာများအတွက်၊ Plant Total RNA Isolation Kit Plus ကို အသုံးပြုရန် အကြံပြုအပ်ပါသည်။

2. DNA-Cleaning Column ကို ခွဲထုတ်ပြီး ဖြစ်နိုင်သော ဆဲလ်အညစ်အကြေးများကို စုပ်ယူပါ။

စုပ်ထုတ်ထားသော ဆဲလ်အပျက်အစီးအမှုန်များသည် RNA စုပ်ယူမှုဆိုင်ရာလုပ်ထုံးလုပ်နည်းများအတွင်း RNA သီးသန့်ကော်လံကို ပိတ်ဆို့နိုင်သည် (လုပ်ထုံးလုပ်နည်း၏ အဆင့် 5၊၊ polysaccharide polyphenol လုပ်ငန်းစဉ်၏ အဆင့် 6 ကိုကြည့်ပါ)။ဆဲလ်အညစ်အကြေးများကို စွန့်ထုတ်ခြင်းမှ ရှောင်ကြဉ်ရန် ဤ supernatant အား သုတ်လိမ်းသည့်အခါ ဂရုတစိုက်ပြုလုပ်ရန် အကြံပြုအပ်ပါသည်။

3. နမူနာ၏ ကနဦးပမာဏသည် ကြီးမားလွန်းသည်။

နမူနာကို အလွန်အကျွံအသုံးပြုခြင်းသည် Buffer PRL1 သို့မဟုတ် Buffer PSL1 ဖြင့် ဆဲလ်များ၏ မပြည့်စုံသောနမူနာကွဲထွက်ခြင်း သို့မဟုတ် မပြည့်စုံသော lysis ကိုဖြစ်ပေါ်စေပြီး သန့်စင်ခြင်းလုပ်ငန်းအတွက် ပိတ်ဆို့နေသော ကော်လံကို ဖြစ်ပေါ်စေသည်။Plant Total RNA Isolation Kit တွင် လုပ်ဆောင်ထားသော နမူနာတစ်ခုအတွက် သန့်စင်မှုတစ်ခုလျှင် ကနဦးအများဆုံး 50 mg ရှိသည်။polyphenol polysaccharides ၏ အပင်နမူနာများအတွက်၊ Plant Total RNA Isolation Kit Plus ကို စမ်းသုံးကြည့်ရန် အကြံပြုအပ်ပါသည်။

4. centrifuge ၏အပူချိန်အလွန်နိမ့်သည်။

နမူနာတစ်ရှူး၏ နိုက်ထရိုဂျင်အရည်ကို နိုက်ထရိုဂျင်အနှောက်အယှက်ဖြစ်စေခြင်းမှလွဲ၍ RNA တစ်ခုလုံးကို သီးခြားခွဲထုတ်ခြင်းနှင့် သန့်စင်ခြင်း အဆင့်အားလုံးကို အခန်းအပူချိန် (20-25°C) တွင် လုပ်ဆောင်သည်။အချို့သော အပူချိန်နိမ့်သော အာရုံခံကိရိယာများသည် အပူချိန် 20°C အောက်တွင် ရှိပြီး DNA-Cleaning Column နှင့်/သို့မဟုတ် RNA-only Column တို့တွင် ပိတ်ဆို့ခြင်းကို ဖြစ်စေနိုင်သည်။ထိုသို့ဖြစ်ပေါ်ပါက၊ စင်ထရီဖယ်အပူချိန်ကို 20-25 ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်တွင်ထားကာ lysis အရောအနှောနှင့်/သို့မဟုတ် အီသနောခွဲထုတ်ခြင်း supernatant ကို 37 ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်သို့ ကြိုတင်ပူနွေးစေပါ။

RNA ထုတ်ယူခြင်းမရှိပါ သို့မဟုတ် RNA အထွက်နှုန်းနည်းသည်။

ပြန်လည်ရယူခြင်းဆိုင်ရာ ထိရောက်မှုအပေါ် သက်ရောက်မှုရှိသည့် အကြောင်းအရင်းများစွာ ရှိပါသည်၊ ဥပမာ- RNA အကြောင်းအရာ၊ လုပ်ဆောင်ချက်နည်းလမ်း၊ elution ပမာဏ စသည်ဖြင့်၊

အဖြစ်များသော အကြောင်းတရားများကို အောက်ပါအတိုင်း လေ့လာဆန်းစစ်ခြင်း။

1. ရေခဲရေချိုးခြင်း သို့မဟုတ် အပူချိန်နိမ့်သော (4°C) လည်ပတ်နေစဉ်အတွင်း အာရုံစူးစိုက်မှုပြုလုပ်ခဲ့သည်။

အကြံပြုချက်- လုပ်ငန်းစဉ်တစ်ခုလုံးတွင် အခန်းအပူချိန် (၁၅-၂၅ ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်) တွင် လုပ်ဆောင်ပါ၊ ရေခဲရေချိုးခြင်းနှင့် အပူချိန်နိမ့်သော အာရုံစူးစိုက်မှုမလုပ်ပါနှင့်။

       2.နမူနာကို မလျော်ကန်စွာ ထိန်းသိမ်းထားခြင်း သို့မဟုတ် နမူနာကို ရေရှည်ထိန်းသိမ်းထားခြင်းကြောင့် RNA သည် ပျက်စီးသွားပါသည်။

အကြံပြုချက်- လတ်လတ်ဆတ်ဆတ်စုဆောင်းထားသောနမူနာများကို နိုက်ထရိုဂျင်အရည်တွင် လျင်မြန်စွာ အေးခဲစေသင့်ပြီး -80°C တွင် အချိန်ကြာမြင့်စွာ သိမ်းဆည်းထားသင့်ပြီး၊ နမူနာများကို ထပ်ခါတလဲလဲ အေးခဲပြီး အရည်ပျော်ခြင်းကို ရှောင်ကြဉ်ပါ။သို့မဟုတ် နမူနာများကို RNA stabilizer RNAlater ဖြေရှင်းချက် (တိရစ္ဆာန်နမူနာများ) တွင် ချက်ချင်းစိမ်ပါ။

       3.နမူနာ အကွဲကွဲအပြားပြားနှင့် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှု မလုံလောက်ပါက သန့်စင်ရေးကော်လံကို ပိတ်ဆို့သွားစေသည်။

အကြံပြုချက်- တစ်ရှူးကို ကြိတ်သောအခါ၊ တစ်ရှူးကို လုံလုံလောက်လောက် မြေသားဖြစ်ကြောင်း သေချာစေပြီး ၎င်းကို ကြိုတင်ပြင်ဆင်ထားသည့် Buffer PSL1 သို့ အမြန်လွှဲပြောင်းပါ (β-ME အချိုးအစားကို မှန်ကန်ကြောင်း အတည်ပြုပါ၊ လုပ်ထုံးလုပ်နည်း၏ အဆင့် 1 ကိုကြည့်ပါ)။

4. The eluent ကို မှားယွင်းစွာ ထည့်ထားပါသည်။

အကြံပြုချက်- RNase-Free ddH ကို သေချာပါစေ။₂O သည် သန့်စင်သောကော်လံအမြှေးပါး၏ အလယ်သို့ ရွှဲနေသည်။

5. အကြွင်းမဲ့ အီသနော၏ မှန်ကန်သော ပမာဏကို Buffer PSL2 သို့မဟုတ် Buffer PRW2 တွင် ထည့်မထားပါ။

အကြံပြုချက်- ညွှန်ကြားချက်များကို လိုက်နာပါ၊ မှန်ကန်သော အီသနော၏ ပမာဏကို Buffer PSL2 နှင့် Buffer PRW2 တွင် ထည့်ပြီး အစုံအလင်ကို အသုံးမပြုမီ ကောင်းစွာ ရောမွှေပါ။

6.တစ်ရှူးနမူနာပမာဏသည် မသင့်လျော်ပါ။

အကြံပြုချက်- Buffer PSL1 ၏ 500 μl တွင် တစ်ရှူး 50 မီလီဂရမ်ကို အသုံးပြုပါ။တစ်ရှူးများကို အလွန်အကျွံအသုံးပြုခြင်းသည် RNA ထုတ်ယူသည့်ပမာဏကို လျော့ကျစေပြီး ရလဒ် RNA ၏ သန့်စင်မှုကိုလည်း လျော့ကျစေမည်ဖြစ်သည်။RNA ထုတ်ယူခြင်းလုပ်ဆောင်မှုတစ်ခုလျှင် ကနဦးနမူနာပမာဏသည် 50 mg ထက်မပိုသင့်ကြောင်း ကျွန်ုပ်တို့ အခိုင်အမာ အကြံပြုအပ်ပါသည်။

7. မသင့်လျော်သော elution အသံအတိုးအကျယ် သို့မဟုတ် မပြည့်စုံသော elution။

အကြံပြုချက်- သန့်စင်ရေးကော်လံ၏ ထင်ရှားသော ပမာဏမှာ 50-200 μl ဖြစ်သည်။elution effect သည် ကျေနပ်ဖွယ်မရှိပါက၊ preheated RNase-Free ddH ကိုထည့်ပြီးနောက် အခန်းအပူချိန်တွင် အချိန်ထပ်တိုးရန် အကြံပြုပါသည်။₂အို၊ 5-10 မိနစ် လိုမျိုး။

8. သန့်စင်သောကော်လံတွင် Buffer PRW2 ဖြင့်ဆေးကြောပြီးနောက် အီသနောအကြွင်းအကျန်များပါရှိသည်။

   အကြံပြုချက်- ပြွန်အလွတ်ကို 1 မိနစ်ကြာ ဗဟိုပြုထားပြီး Buffer PRW2 တွင် ဆေးကြောပြီးနောက် အီသနောကျန်နေသေးပါက၊ ကြွင်းကျန်နေသော အီသနောကို အပြည့်အဝဖယ်ရှားရန် သန့်စင်သောကော်လံကို 2 မိနစ်အထိ ထားနိုင်သည်။

၉။ ကိရိယာကို မှားယွင်းစွာ အသုံးပြုခဲ့သည်။

   အကြံပြုချက်- polyphenolic polysaccharides ၏ အပင်နမူနာများအတွက်၊ Plant Total RNA Isolation Kit ကဲ့သို့သော အသုံးများသော အစုံအလင်ကို အသုံးပြု၍ စံပြ RNA နမူနာများကို ရယူနိုင်မည် မဟုတ်ပါ။polyphenolic polysaccharide အပင်နမူနာအတွက် အထူးဒီဇိုင်းထုတ်ထားသည့် Plant Total RNA IsolationKit Plus ကို အသုံးပြုရန် သင့်အား အကြံပြုအပ်ပါသည်။polyphenol နှင့် polysaccharide အပင်နမူနာများမှ RNA ထုတ်ယူရန်အတွက် အထူးထုတ်လုပ်ထားသော ကိရိယာအစုံ။

OD260/OD280 တန်ဖိုး နိမ့်ပါသည်။

ddH ဖြင့် RNA elution₂O နှင့် spectrophotometer ဖတ်ရှုခြင်းအတွက် အသုံးပြုသော OD260/OD280 တန်ဖိုးများ နည်းပါးပါသည်။10 mM Tris-HCl, pH 7.5 (RNase-Free ddH ထက် 10 mM Tris-HCl ကို အသုံးပြုရန် အကြံပြုပါသည်။₂O မှ RNA) မှန်ကန်သော OD260/OD280 တန်ဖိုးများကို ရယူရန် စာမျက်နှာ 19 ရှိ “RNA အာရုံစူးစိုက်မှုနှင့် သန့်စင်မှုဆိုင်ရာ စစ်ဆေးမှု” ကို ကြည့်ပါ။

သန့်စင်ထားသော RNA သည် ပျက်စီးသွားသည်။

သန့်စင်ထားသော RNA ၏အရည်အသွေးသည် နမူနာထိန်းသိမ်းခြင်း၊ RNase ညစ်ညမ်းခြင်းနှင့် ခြယ်လှယ်ခြင်းစသည့်အချက်များနှင့် ဆက်စပ်နေသည်။

အဖြစ်များသော အကြောင်းရင်းများကို လေ့လာခြင်း-

1. တစ်ရှူးနမူနာများကို စုဆောင်းပြီးနောက် အချိန်မီ မသိမ်းဆည်းပါ။

    အကြံပြုချက်- စုဆောင်းပြီးနောက် တစ်ရှူးနမူနာများကို အချိန်မီအသုံးမပြုပါက၊ ၎င်းတို့ကို နိုက်ထရိုဂျင်အနိမ့်အပူချိန်တွင် ချက်ချင်းသိမ်းဆည်းပါ သို့မဟုတ် နိုက်ထရိုဂျင်အရည်တွင် အမြန်အေးခဲပြီးနောက် ရေရှည်သိုလှောင်ရန်အတွက် -80°C သို့ လွှဲပြောင်းပါ၊ သို့မဟုတ် နမူနာများကို RNA stabilizer RNAlater solution (တိရစ္ဆာန်နမူနာများ) တွင် ချက်ခြင်းနှစ်မြှုပ်ပါ။RNA ထုတ်ယူရန်အတွက်၊ လတ်ဆတ်စွာစုဆောင်းထားသော တစ်ရှူးနမူနာများကို အသုံးပြုကြည့်ပါ။

2. တစ်ရှူးနမူနာများကို ထပ်ခါတလဲလဲ အေးခဲပြီး သုတ်ခြင်း။

   အကြံပြုချက်- တစ်ရှူးနမူနာများကို သိမ်းဆည်းသည့်အခါ၊ ထိန်းသိမ်းရန်အတွက် ၎င်းတို့ကို အတုံးသေးသေးလေးများဖြစ်အောင် လှီးဖြတ်ပြီး နမူနာများကို ထပ်ခါတလဲလဲ အေးခဲပြီး ရောနှောခြင်းကြောင့်ဖြစ်သော RNA ၏ ပျက်စီးယိုယွင်းမှုကို ရှောင်ရှားရန် ၎င်းတို့ကို အသုံးပြုသည့်အခါ ၎င်းတို့ထဲမှ တစ်စိတ်တစ်ပိုင်းကို ထုတ်ယူခြင်းသည် အကောင်းဆုံးဖြစ်သည်။

3.RNase ကို ခွဲစိတ်ခန်းတွင် မိတ်ဆက်သည် သို့မဟုတ် တစ်ခါသုံးလက်အိတ်များ၊ မျက်နှာဖုံးများ စသည်တို့ကို မဝတ်ဆင်ပါ။

   အကြံပြုချက်- RNA ထုတ်ယူခြင်းစမ်းသပ်မှုများကို သီးခြား RNA လုပ်ဆောင်ချက်များတွင် အကောင်းဆုံးလုပ်ဆောင်ပြီး စမ်းသပ်မှုမပြုမီ ဓာတ်ခွဲခန်းဇယားကို သန့်စင်ထားသင့်ပြီး RNase ၏ နိဒါန်းကြောင့်ဖြစ်ရသည့် RNA ပျက်စီးမှုကို အကြီးမားဆုံးအတိုင်းအတာအထိ ရှောင်ရှားရန်အတွက် တစ်ခါသုံးလက်အိတ်များနှင့် မျက်နှာဖုံးများကို ဝတ်ဆင်သင့်ပါသည်။

4.အသုံးပြုနေစဉ်အတွင်း RNase မှ ညစ်ညမ်းနေသော ဓါတ်ပစ္စည်းများကို။

   အကြံပြုချက်- ဆက်စပ်စမ်းသပ်မှုများအတွက် အပင်စုစုပေါင်း RNA ထုတ်ယူသည့်ကိရိယာအစုံအသစ်ဖြင့် အစားထိုးပါ။

5. RNA ခြယ်လှယ်မှုအတွက် အသုံးပြုသည့် centrifuge tubes နှင့် pipette အကြံပေးချက်များသည် RNase နှင့် ညစ်ညမ်းနေပါသည်။

အကြံပြုချက်- RNA ထုတ်ယူရာတွင် အသုံးပြုသည့် centrifuge tubes၊ pipette tips, pipettes စသည်တို့သည် RNase-Free ဖြစ်ကြောင်း သေချာပါစေ။

ညွှန်ကြားချက်လက်စွဲများ-

Plant Total RNA Isolation Kit လမ်းညွှန်ချက်