နိဒါန်း-

RNA၊ သိပ္ပံအမည် ribonucleic acid၊ ၎င်း၏အတိုကောက် RiboNucleic Acid သည် phosphodiester နှောင်ကြိုးများမှတဆင့် အနည်းဆုံး ribonucleotides ဒါဇင်ပေါင်းများစွာကို ချိတ်ဆက်၍ ဖွဲ့စည်းထားသော nucleic acid အမျိုးအစားဖြစ်သည်။

RNA စူးစမ်းလေ့လာခြင်း၏ အနှစ်ချုပ်မှာ ညစ်ညမ်းမှုမရှိသော စုစုပေါင်း RNA ကို ထုတ်ယူရန်ဖြစ်ပြီး RNA ထုတ်ယူခြင်း၏ အခြေခံမူကို အောက်ပါအတိုင်း အကြမ်းဖျင်း အကျဉ်းချုံးနိုင်ပါသည်။

1. ဆဲလ်များကို ဦးစွာ နှောင့်ယှက်ပါ။

2. ထို့နောက် macromolecular အညစ်အကြေးများ (ပရိုတင်း၊ lipid၊ DNA စသည်) ကို ဖယ်ရှားပါ။

3. နောက်ဆုံးတွင်၊ RNA သည် ဆားများနှင့် အော်ဂဲနစ်ပျော်ဝင်ပစ္စည်းများကို ဖယ်ရှားစဉ်တွင် ရွာသွန်းပြီး RNA ကို ပိုမိုသန့်စင်စေသည်။

အတိတ်နှင့် ပစ္စုပ္ပန် ထုတ်ယူနည်း

RNA ထုတ်ယူခြင်းနည်းလမ်း၏ ပထမမျိုးဆက်သည် TRIzol မိုးရွာသွန်းမှုနည်းလမ်း (guanidine isothiocyanate၊ phenol၊ chloroform စသည်ဖြင့်) အသုံးပြုထားသော ဓာတ်ပစ္စည်းများသည် Piotr Chomczynski နှင့် အဖွား Nicoletta Sacchi ဟုခေါ်သော အဖိုးတစ်ဦးမှ တီထွင်ခဲ့သောကြောင့်၊

နောက်ပိုင်းတွင် အဘိုးသည် ဤမူပိုင်ခွင့်ကို Invitrogen သို့ ရောင်းချခဲ့ပြီး Invitrogen သည် ဤနည်းလမ်းကို ကမ္ဘာသို့ မြှင့်တင်ခဲ့ပြီး တွင်ကျယ်စွာ အသုံးပြုသည့် နည်းလမ်းဖြစ်လာခဲ့သည်။

နောက်ပိုင်းတွင်၊ Invitrogen ကို Thermo မှ ရယူခဲ့သည်။

ကိုယ်စားပြုထုတ်ကုန်- Invitrogen ၏ TRIzol ဓာတ်ပစ္စည်းများ

သို့သော်၊ TRIzol မိုးရွာသွန်းမှုနည်းလမ်းသည် မိုးရွာသွန်းမှုနှင့် RNA အများအပြားကို ထုတ်ယူရန် လိုအပ်ပြီး အသုံးပြုထားသော ဓါတ်ပစ္စည်းများသည် အဆိပ်သင့်ပြီး လည်ပတ်ရန် အချိန်ကြာမြင့်သည်။

ထို့ကြောင့်၊ ဒုတိယမျိုးဆက် ကော်လံ-အင်ဇိုင်းသန့်စင်မှုနည်းလမ်းသည် အခြားအညစ်အကြေးများကို ဖယ်ရှားစဉ်တွင် နမူနာအတွင်းရှိ RNA ၏ ပြန်လည်ကောင်းမွန်မှုကို အမြင့်ဆုံးဖြစ်စေရန် စီလီကာဂျယ်အမြှေးပါးကို တိကျသော nucleic acid စုပ်ယူမှုပစ္စည်းအဖြစ် အသုံးပြု၍ စတင်ပေါ်ပေါက်လာခဲ့သည်။

ဒုတိယမျိုးဆက်နည်းလမ်းသည် တည်ငြိမ်သောစွမ်းဆောင်မှုအပေါ်အခြေခံ၍ လုပ်ဆောင်ချက်ကို ရိုးရှင်းစေပြီး၊ အန္တရာယ်အချက်ကို လျှော့ချပေးပြီး RNA ထုတ်ယူမှု၏ ထိရောက်မှုကို တိုးတက်စေသည်။

ကိုယ်စားပြုထုတ်ကုန်- QIAGEN RNeasy နှင့်အများဆုံးပြည်တွင်းထုတ်ကုန်

သို့ရာတွင်၊ ပထမနှင့် ဒုတိယမျိုးဆက်နည်းလမ်းနှစ်ခုစလုံးသည် DNA ညစ်ညမ်းမှုကို ဖယ်ရှားရန် DNase ကို အသုံးပြုရန်လိုအပ်ပြီး ယင်းသည် နောက်ဆက်တွဲအောက်ပိုင်းစမ်းသပ်မှုများတွင် အဆင်မပြေမှုအချို့ကို ဆောင်ကြဉ်းပေးပါသည်။ကျန်ရှိသော DNase သည် ပြောင်းပြန်ကူးယူခြင်း၏ ထိရောက်မှုကို လျှော့ချပြီး ပထမတန်း cDNA ပေါင်းစပ်မှုကို လျှော့ချပေးကာ ရလဒ်များ၏ တိကျမှုကို ထိခိုက်စေပါသည်။

ထို့ကြောင့် တတိယမျိုးဆက် ထုတ်ယူခြင်းနည်းလမ်းကို ဒုတိယမျိုးဆက်၏ အခြေခံဖြင့် ပိုမိုကောင်းမွန်အောင် ပြုလုပ်ထားသည်။စမ်းသပ်မှုတွင် မည်သည့်အင်ဇိုင်းများထည့်ရန် မလိုအပ်ဘဲ RNA ကော်လံနှစ်ခုသာ အလွယ်တကူ ရရှိနိုင်သည်။

ကော်လံ 1- DNA ရှင်းရန် DNA-Cleaning Column

ကော်လံ 2- RNA-only ကော်လံသည် RNA ကို အထူးစုပ်ယူပြီး ပြန်လည်ရယူသည်။

ဤကဲ့သို့ ရိုးရှင်းသောလုပ်ဆောင်ချက်သည် အချိန်ကုန်သက်သာစေရုံသာမက ရေအောက်ပိုင်းစမ်းသပ်မှုများ၏လုပ်ဆောင်မှုကိုလည်း လွယ်ကူချောမွေ့စေပါသည်။

ကိုယ်စားလှယ်ထုတ်ကုန်- QIAGEN RNeasy Plus နှင့်ForegeneRNA သန့်စင်မှုစီးရီးထုတ်ကုန်များ

(RNeasy Plus)

(Foregene ၏အပင်စုစုပေါင်း RNA သီးခြားခွဲထုတ်ကိရိယာ)

တိတ်တိတ်လေးပြောပါ။Foregene ၏ RNA ကိရိယာအစုံသည် လူ့ခန္ဓာကိုယ်ထဲသို့ မည်သည့်အဆိပ်အတောက်မျှမထည့်ဘဲ 1 မိနစ်အတွင်း အစိုင်အခဲမျက်နှာပြင်ပေါ်ရှိ 400μg RNase ကို လုံးဝဖယ်ရှားပေးနိုင်သည့် အလွန်အသုံးပြုရလွယ်ကူသော RNase Eraser ကိုလည်း တင်ဆက်ထားပါသည်။

ပုံ1- လုပ်ငန်းဆောင်ရွက်မှု လုပ်ငန်းစဉ် နှိုင်းယှဉ်ဇယား

Foregene ၏ထုတ်ကုန်များသည် RNA ထုတ်ယူမှုကို သီချင်းနှစ်ပုဒ်မျှဖြင့် အပြီးသတ်နိုင်သည်၊ သင်၏စမ်းသပ်မှုတိုးတက်မှုကို အခြားသူများကို မနာလိုစေနှင့်။

ပုံ၂-Eစမ်းသပ်မှုရလဒ်များ နှိုင်းယှဉ်ဇယား

ပထမမျိုးဆက် (1: TRIzol)

ဒုတိယမျိုးဆက် (2: RNeasy of QIAGEN)

တတိယမျိုးဆက် (3: QIAGEN's RNeasy plus, 4: Foregene)

ပုံ3- qPCR ဂရပ် (ချဲ့ထွင်မှုမျဉ်းဂရပ်)

ပထမမျိုးဆက် (အစိမ်းရောင်ဆိုသည်မှာ TRIzol ၊ အနီရောင်သည် TRIzol + ဖြစ်သည်)၊

ဒုတိယမျိုးဆက် (ကောင်းကင်ပြာသည် QIAGEN RNeasy-၊ အနီရောင် ဆိုသည်မှာ QIAGEN RNeasy +)

တတိယမျိုးဆက် (အပြာသည် QIAGEN RNeasy အပေါင်း၊ အစိမ်းသည် Foregene ကို ဆိုလိုသည်)

(မှတ်ချက်- qPCR ဂရပ် “-” သည် DNase မထည့်ရသေးဘဲ DNA ညစ်ညမ်းမှုကို မဖယ်ရှားကြောင်း ညွှန်ပြသည်။ ထို့ကြောင့် CT သည် ပိုမိုမြင့်မားပြီး ရလဒ်မှာ တိကျမှုမရှိပါ၊ “+” သည် DNase ကို ထည့်သွင်းပြီး DNA ညစ်ညမ်းမှုကို ဖယ်ရှားလိုက်ကြောင်း ဖော်ပြသည်၊ ရလဒ်သည် တိကျသည်)

နည်းပညာပိုင်းဆိုင်ရာ အဆင့်မြှင့်တင်မှုတိုင်းသည် စမ်းသပ်မှု၏လုပ်ဆောင်ချက်သည် ပိုမိုရိုးရှင်းပြီး အသုံးပြုရလွယ်ကူသော ဦးတည်ချက်ဖြင့် တိုးတက်နေခြင်းဖြစ်ကြောင်း ဆိုလိုသည်။

Foregene သည် သိပ္ပံနည်းကျ သုတေသီများအား စမ်းသပ်ချိန်နှင့် ကုန်ကျစရိတ်ကို သက်သာစေရန်၊ အရည်အသွေးမြင့် စမ်းသပ်မှုရလဒ်များရရှိရန်နှင့် ပိုမိုတန်ဖိုးရှိသော သိပ္ပံနည်းကျ သုတေသနအောင်မြင်မှုများကို ပူးတွဲဖန်တီးရန် ကူညီပေးနိုင်ရန် ရည်ရွယ်ပါသည်။