PCR တုံ့ပြန်မှုများ ပြုလုပ်သည့်အခါ လူတိုင်းသည် ထိုသို့သော သို့မဟုတ် ထိုကဲ့သို့သော ပြဿနာများကို အမြဲကြုံတွေ့ရမည်ဟု ယုံကြည်သော်လည်း အများစုကို အဓိက ပြဿနာနှစ်ခုအဖြစ် ခွဲခြားနိုင်သည်-

မျိုးဗီဇပုံစံပုံစံ၏ ချဲ့ထွင်မှု အနည်းငယ်သာ (ချဲ့ထွင်ခြင်း)၊
ပစ်မှတ်မဟုတ်သော မျိုးဗီဇ ချဲ့ထွင်မှု အလွန်များသည်။
ဓာတုပစ္စည်းများကို အသုံးပြုခြင်းသည် ဤပြဿနာများကို ဖြေရှင်းရန် ဘုံနည်းဗျူဟာများထဲမှ တစ်ခုဖြစ်သည်။အများအားဖြင့် additives ၏ အခန်းကဏ္ဍတွင် ရှုထောင့်နှစ်မျိုးရှိသည်။
အလယ်တန်းဖွဲ့စည်းပုံမျိုးဗီဇ (အလယ်တန်းဖွဲ့စည်းပုံ);
သီးသန့်မဟုတ်သော လိမ်းဆေးကို လျှော့ချပါ။
ယနေ့တွင် တည်းဖြတ်သူသည် PCR တုံ့ပြန်မှုများနှင့် ၎င်းတို့၏လုပ်ဆောင်ချက်များတွင် အသုံးများသော ဖြည့်စွက်ပစ္စည်းများကို သင့်အား အတိုချုပ် မိတ်ဆက်ပေးပါမည်။
အလယ်တန်းဖွဲ့စည်းပုံကိုလျှော့ချသော additives
sulfoxide(DMSO)
မျိုးဗီဇနမူနာများမြင့်မားသော GC အကြောင်းအရာနှင့်အတူ။သို့သော်၊ DMSO သည် Taq polymerase လုပ်ဆောင်ချက်ကို အလွန်လျှော့ချပေးသည်။ထို့ကြောင့်၊ လူတိုင်းသည် ပုံစံပလိတ်သုံးစွဲနိုင်မှုနှင့် polymerase ၏လုပ်ဆောင်ချက်ကို ချိန်ခွင်လျှာညှိရန် လိုအပ်သည်။သင်၏စမ်းသပ်မှုနှင့်ကိုက်ညီသောအာရုံစူးစိုက်မှုကိုရှာဖွေရန် 2% မှ 10% ကဲ့သို့သော DSMO ၏ မတူညီသောအာရုံစူးစိုက်မှုကို စမ်းကြည့်နိုင်သည်ဟု တည်းဖြတ်သူက အကြံပြုထားသည်။
အိုင်းယွန်းမဟုတ်သော ဆပ်ပြာများ
0.1-1% Triton X-100၊ Tween 20 သို့မဟုတ် NP-40 ကဲ့သို့သော အိုင်ယွန်မဟုတ်သော ဆပ်ပြာများသည် များသောအားဖြင့် DNA ဒုတိယဖွဲ့စည်းပုံကို လျှော့ချပေးသည်။၎င်းသည် ပုံစံပလိတ်ဗီဇ၏ ချဲ့ထွင်မှုကို တိုးစေနိုင်သော်လည်း၊ အတိအကျမဟုတ်သော ချဲ့ထွင်မှုကိုလည်း ပြဿနာဖြစ်စေသည်။ထို့ကြောင့်၊ ဤ additives များသည် အပျက်အစီးများမပါဘဲ အထွက်နှုန်းနည်းသော PCR တုံ့ပြန်မှုများအတွက် ကောင်းစွာလုပ်ဆောင်နိုင်သော်လည်း အတော်အတန်မသန့်ရှင်းသော PRC တုံ့ပြန်မှုများအတွက် အလွန်ကောင်းမွန်ပါသည်။အိုင်ယွန်မဟုတ်သော ဆပ်ပြာများ၏ နောက်ထပ်အကျိုးကျေးဇူးမှာ SDS ညစ်ညမ်းမှုကို လျှော့ချပေးခြင်း ဖြစ်သည်။ပုံမှန်အားဖြင့် DNA ထုတ်ယူခြင်းလုပ်ငန်းစဉ်အတွင်း၊ SDS သည် Polymerase ၏လုပ်ဆောင်မှုကို လွန်စွာဟန့်တားသည့် PCR အဆင့်သို့ ခေါ်ဆောင်သွားမည်ဖြစ်သည်။ထို့ကြောင့်၊ တုံ့ပြန်မှုတွင် 0.5% Tween-20 သို့မဟုတ် Tween-40 ပေါင်းထည့်ခြင်းသည် SDS ၏ ဆိုးကျိုးများကို ပျက်ပြယ်စေသည်။
Betaine_
Betaine သည် ဒုတိယဖွဲ့စည်းပုံဖွဲ့စည်းပုံကို လျှော့ချခြင်းဖြင့် DNA ချဲ့ထွင်မှုကို မြှင့်တင်နိုင်ပြီး ယေဘုယျအားဖြင့် စီးပွားဖြစ် PCR kits များ "လျှို့ဝှက်ဆန်းကြယ်" ပေါင်းစည်းမှုတစ်ခုဖြစ်သည်။betaine ကိုအသုံးပြုလိုပါက betaine သို့မဟုတ် betaine mono-hydrate (Betaine or Betaine mono-hydrate) ကိုထည့်သင့်သည်၊ သို့သော် betaine hydrochloride (Betaine HCl) ၏နောက်ဆုံးပြင်းအား 1-1.7M သို့ချိန်ညှိသင့်သည်။Betaine သည် DNA အရည်ပျော်ခြင်း/DNA denaturation ၏ အခြေခံတွဲစပ်ဖွဲ့စည်းမှုအပေါ် မှီခိုအားထားမှုကို ဖယ်ရှားပေးသောကြောင့် တိကျမှုကို မြှင့်တင်ပေးနိုင်သည်။
သီးသန့်မဟုတ်သော priming ကိုလျှော့ချရန် additives
ဖော်မာမီ
Formamide သည် အသုံးများသော အော်ဂဲနစ် PCR ဖြည့်စွက်ဆေးဖြစ်သည်။၎င်းသည် DNA ရှိ အဓိက groove နှင့် minor groove တို့နှင့် ပေါင်းစပ်နိုင်ပြီး master DNA double helix ၏ တည်ငြိမ်မှုကို လျှော့ချပေးပြီး DNA ၏ အရည်ပျော်မှုကို လျှော့ချပေးနိုင်သည်။PCR စမ်းသပ်မှုများတွင် အသုံးပြုသော ဖော်မိုင်း၏အာရုံစူးစိုက်မှုသည် များသောအားဖြင့် 1%-5% ဖြစ်သည်။
Tetramethylammonium ကလိုရိုက်( TMAC)
Tetramethylammonium chloride သည် မျိုးစပ်ခြင်း (hybridization specificity) ကို တိုးမြင့်စေပြီး DNA ၏ အရည်ပျော်မှုကို တိုးစေသည်။ထို့ကြောင့် TMAC သည် သီးခြားမဟုတ်သော priming ကို ဖယ်ရှားနိုင်ပြီး DNA နှင့် RNA ၏ ရောနှောမှုကို လျှော့ချနိုင်သည်။သုံးရင်primers တွေကို ပျက်ယွင်းစေပါတယ်။PCR တုံ့ပြန်မှုတွင် အများအားဖြင့် 15-100mM တွင်အသုံးပြုသော TMAC ကိုထည့်ရန်မမေ့ပါနှင့်။
အခြားသော အသုံးများသော ဖြည့်စွက်ပစ္စည်းများ
အထက်ဖော်ပြပါ additives အမျိုးအစား နှစ်ခုအပြင် PCR တုံ့ပြန်မှုများတွင် တူညီသော additives အများအပြားပါရှိသော်လည်း ၎င်းတို့တွင် မတူညီသောလုပ်ဆောင်ချက်များ ရှိသော်လည်း ၎င်းတို့သည် အလွန်အရေးကြီးပါသည်။
မဂ္ဂနီဆီယမ်အိုင်းယွန်း
Magnesium ion သည် polymerase ၏ မရှိမဖြစ်လိုအပ်သော cofactor (cofactor) ဖြစ်သည်၊ ဆိုလိုသည်မှာ မဂ္ဂနီဆီယမ်အိုင်းယွန်းမပါသော polymerase သည် မလှုပ်ရှားနိုင်ပါ။သို့သော်လည်း မဂ္ဂနီဆီယမ်အိုင်းယွန်း များလွန်းပါက ပေါ်လီမာရစ်၏ စွမ်းဆောင်ရည်ကို ထိခိုက်စေနိုင်သည်။PCR တုံ့ပြန်မှုတစ်ခုစီတွင် မဂ္ဂနီဆီယမ်အိုင်းယွန်း၏ အာရုံစူးစိုက်မှုသည် ကွဲပြားလိမ့်မည်။Chelating အေးဂျင့်များ (ထိုကဲ့သို့သော EDTA သို့မဟုတ် citrate ကဲ့သို့) dNTPs နှင့် ပရိုတင်းများ၏ အာရုံစူးစိုက်မှုသည် မဂ္ဂနီဆီယမ်အိုင်းယွန်းများ၏ အာရုံစူးစိုက်မှုကို ထိခိုက်စေပါသည်။ထို့ကြောင့်၊ သင်၏ PCR စမ်းသပ်မှုတွင် ပြဿနာများရှိပါက၊ ကွဲပြားသော မဂ္ဂနီဆီယမ်အိုင်းယွန်းပြင်းအားကို ဥပမာအားဖြင့် 1.0 မှ 4.0mM ကြားကြားကာလ 0.5–1mM ကြားဖြင့် ပြောင်းလဲရန် ကြိုးစားနိုင်သည်။
မဂ္ဂနီဆီယမ် ကလိုရိုက်ဖြေရှင်းချက်၏ အာရုံစူးစိုက်မှု ကွဲပြားမှုကို ဖြစ်ပေါ်စေနိုင်သည်ကို သတိပြုသင့်သည်။ဒါကြောင့် အသုံးမပြုခင်မှာ လုံးလုံးဖျော်ပြီး အသုံးမပြုခင် ရောမွှေရပါမယ်။
Bovine သွေးရည်ကြည် အယ်လ်ဘမ်(Bovine albumin၊ BSA)
မော်လီကျူးဓာတုဗေဒ စမ်းသပ်မှုများတွင်၊ ဘော့စ်သွေးရည်ကြည် အယ်လ်ဘမ်မင်သည် အထူးသဖြင့် ကန့်သတ်အင်ဇိုင်းအစာခြေခြင်းနှင့် PCR စမ်းသပ်မှုများတွင် အလွန်အသုံးများသော ဖြည့်စွက်ပစ္စည်းဖြစ်သည်။PCR တုံ့ပြန်မှုများတွင် BSA သည် ဖီနိုလစ်ဒြပ်ပေါင်းများကဲ့သို့သော ညစ်ညမ်းမှုများကို လျှော့ချရာတွင် အထောက်အကူဖြစ်စေသည်။ထို့အပြင် ၎င်းသည် စမ်းသပ်ပြွန်နံရံတွင် ဓာတ်ပြုသူများ၏ ကပ်ငြိမှုကို လျှော့ချနိုင်သည်ဟုလည်း ဆိုကြသည်။PCR တုံ့ပြန်မှုတွင်၊ အများအားဖြင့် BSA ၏အာရုံစူးစိုက်မှုသည် 0.8 mg/ml သို့ရောက်ရှိနိုင်သည်။
 
ဆက်စပ်ထုတ်ကုန်များ-
PCR သူရဲကောင်း(ဆိုးဆေးဖြင့်)
PCR သူရဲကောင်း