Direct PCR သည် nucleic acid ထုတ်ယူခြင်းမရှိဘဲ ချဲ့ထွင်ရန်အတွက် တိရစ္ဆာန် သို့မဟုတ် အပင်တစ်ရှူးများကို တိုက်ရိုက်အသုံးပြုသည့် တုံ့ပြန်မှုတစ်ခုဖြစ်သည်။နည်းလမ်းများစွာတွင်၊ တိုက်ရိုက် PCR သည် ပုံမှန် PCR ကဲ့သို့ အလုပ်လုပ်သည်။

အဓိကကွာခြားချက်မှာ တိုက်ရိုက် PCR တွင်အသုံးပြုသည့် စိတ်ကြိုက်ကြားခံဖြစ်ပြီး၊ နမူနာအား nucleic acid ထုတ်ယူခြင်းမရှိဘဲ PCR တုံ့ပြန်မှုတွင် တိုက်ရိုက်သက်ရောက်နိုင်သည်၊ သို့သော် အင်ဇိုင်းများ၏ခံနိုင်ရည်နှင့် တိုက်ရိုက် PCR တုံ့ပြန်မှုတွင်ပါဝင်သော ကြားခံ၏လိုက်ဖက်ညီမှုအတွက် သက်ဆိုင်သောလိုအပ်ချက်များရှိပါသည်။

သာမာန်နမူနာများတွင် PCR inhibitors များ အနည်းအများ ရှိသော်လည်း၊ တိုက်ရိုက် PCR သည် အင်ဇိုင်းများနှင့် ကြားခံများ၏ လုပ်ဆောင်မှုအောက်တွင် ယုံကြည်စိတ်ချရသော ချဲ့ထွင်မှုကို ရရှိနိုင်ပါသည်။သမားရိုးကျ PCR တုံ့ပြန်မှုသည် ပရိုတင်းနှင့် အခြားအညစ်အကြေးများပါ၀င်ပါက ပရိုတင်းနှင့် အခြားအညစ်အကြေးများပါ၀င်ပါက PCR တုံ့ပြန်မှု၏ချောမွေ့တိုးတက်မှုကို ဟန့်တားနိုင်သည့် နမူနာပုံစံတစ်ခုအနေဖြင့် အရည်အသွေးမြင့် နျူကလိစ်အက်ဆစ် လိုအပ်ပါသည်။Direct PCR သည် လက်ရှိတွင် မော်လီကျူးရောဂါရှာဖွေရေးနယ်ပယ်တွင် လူကြိုက်များသောနည်းပညာများထဲမှတစ်ခုဖြစ်သည်။

01 Direct PCR ကို မူလက တိရစ္ဆာန်နှင့် အပင်အတွက် အသုံးပြုခဲ့သည်။

တိုက်ရိုက် PCR ၏ အစောဆုံး အသုံးချမှုသည် ကြွက်၊ ကြောင်၊ ကြက်၊ ယုန်၊ သိုး၊ နွား စသည်တို့၏ သွေး၊ တစ်သျှူးနှင့် အမွေးများ ကဲ့သို့သော တိရစ္ဆာန်များနှင့် အပင်များ၏ နယ်ပယ်တွင်၊ မျိုးရိုးလိုက်ခြင်း၊ မျိုးရိုးလိုက်ခြင်း၊ မျိုးရိုးလိုက်ခြင်း၊ ပလာစမစ် ရှာဖွေခြင်း၊ မျိုးရိုးလိုက်ခြင်း ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်း၊ DNA အရင်းအမြစ် ခွဲခြားသတ်မှတ်ခြင်း၊ မျိုးစိတ်ခွဲခြားသတ်မှတ်ခြင်းနှင့် အခြားနယ်ပယ်များကို လေ့လာရန်၊ SNP

ဤနယ်ပယ်များတွင် တူညီသောအင်္ဂါရပ်အချို့ရှိသည်၊ ဆိုလိုသည်မှာ ပစ်မှတ်မျိုးရိုးဗီဇပါဝင်မှုသည် မြင့်မားပြီး nucleic acid ထုတ်ယူရာတွင် အခက်အခဲရှိသောကြောင့် တိုက်ရိုက် PCR သည် အချိန်ကုန်သက်သာစေရုံသာမက ရလဒ်များအပေါ်တွင်လည်း သက်ရောက်မှုအနည်းငယ်ရှိရုံသာမက ကုန်ကျစရိတ်ကိုလည်း သက်သာစေပါသည်။

ရောဂါပိုးရှာဖွေခြင်းအတွက် တိုက်ရိုက်သုံးသော PCR သည် မကြာသေးမီနှစ်များအတွင်း အချို့သော PCR ဓါတ်ဆေးထုတ်လုပ်သူများသည် ဆန်းသစ်တီထွင်မှုပြုလုပ်ရာတွင် ဤဦးတည်ချက်တွင် ကြိုးပမ်းအားထုတ်မှုများစွာ ပြုလုပ်ခဲ့ကြသည်။အထူးသဖြင့် ဤ COVID-19 ကပ်ရောဂါတွင်၊ SARS-CoV-2 Nucleic Acid Detection Kit (Multiplex PCR Fluorescent Probe Method) ကဲ့သို့သော ထောက်လှမ်းနိုင်သော ထုတ်ကုန်များစွာသည် ဈေးကွက်တွင် ပေါ်ထွက်ခဲ့ပြီး SARS-CoV-2 သို့မဟုတ် nucleic acid သို့မဟုတ် nucleicophngsongsary 2 ၏ SARS-CoVsngsary (သို့) SARS-CoVsng-2e 2 ၏ အရည်အသွေးကို အချိန်နှင့်တပြေးညီ သိရှိနိုင်စေရန်အတွက် Foregene မှ သုတေသနပြုတီထွင်ခဲ့သည်။ .

Foregene သည် သာမာန် ORF1ab၊ N၊ E နှင့် Direct PCR နည်းပညာကို အသုံးပြုထားသည့် ကုမ္ပဏီများထဲမှ တစ်ခုဖြစ်သည်။မူကွဲ SARS-CoV-2 B.1.1.7 မျိုးရိုး (UK), B.1.351 မျိုးရိုး (ZA), B.1.617 မျိုးရိုး (IND) နှင့် P.1 မျိုးရိုး (BR) ကဲ့သို့သော လူ့ nasopharyngeal သို့မဟုတ် oropharyngeal swab နမူနာများတွင် nucleic acids မျိုးရိုးစဉ်ဆက်များ။

02  တိုက်ရိုက် PCR အတွက် လိုအပ်သော ဓာတ်ပစ္စည်းများ

နမူနာ Lysate

နမူနာ lysate ကို သင်ကိုယ်တိုင် ပြင်ဆင်သတ်မှတ်နိုင်သည် သို့မဟုတ် ဝယ်ယူနိုင်သည်။မတူညီသော lysate အမှတ်တံဆိပ်များ၏ ပါဝင်မှု ကွာခြားမှုသည် lysing လုပ်နိုင်စွမ်းကို ကွဲပြားစေမည်ဖြစ်ပြီး၊ ထို့နောက် lysing time သည် အနည်းငယ် ကွဲပြားမည်ဖြစ်သည်။ဥပမာအားဖြင့်၊ တိရိစ္ဆာန်တစ်ရှူးနမူနာများပြင်ဆင်မှုအတွက်၊ မိနစ် 30 သို့မဟုတ် တစ်ညလုံး lysis ကို ယေဘုယျအားဖြင့် အကြံပြုထားပြီး ဗိုင်းရပ်စ်များအတွက် lysis solution သည် 3-10 မိနစ်အထိဖြစ်သည်။

PCR မာစတာရောနှော

တိကျသောချဲ့ထွင်မှုကိုတိုးမြှင့်ရန်နှင့်ချဲ့ထွင်နိုင်စွမ်းကိုတိုးမြှင့်ရန်အတွက် hot-start DNA polymerase ကိုအသုံးပြုရန်အကြံပြုထားသည်။တိုက်ရိုက် PCR ၏ core သည် အလွန်ခံနိုင်ရည်ရှိသော polymerase ဖြစ်သည်။

DNA ချဲ့ထွင်ခြင်းကို ထိခိုက်စေသော နမူနာရှိ အစိတ်အပိုင်းများကို ဖယ်ရှားခြင်း သို့မဟုတ် တားစီးခြင်း။

နမူနာအား lysate ဖြင့်လုပ်ဆောင်ပြီးနောက်၊ ပရိုတိန်းများ၊ lipid နှင့် အခြားဆဲလ်အပျက်အစီးများကို ထုတ်ပေးမည်ဖြစ်ပြီး၊ အဆိုပါအရာများသည် PCR တုံ့ပြန်မှုကို ဟန့်တားမည်ဖြစ်သည်။ထို့ကြောင့်၊ တိုက်ရိုက် PCR သည် ဤအချက်များ၏ သြဇာလွှမ်းမိုးမှုကို လျှော့ချရန် သက်ဆိုင်ရာ ဖယ်ရှားခြင်း သို့မဟုတ် တားဆီးခြင်းများကို ပေါင်းထည့်ရန် လိုအပ်သည်။

03  တိုက်ရိုက် PCR ၏ အသိပညာ အချက်ငါးချက် စုစည်းမှု

ပထမ၊ Direct PCR နည်းပညာသည် ဇီဝနမူနာအမျိုးမျိုးအတွက် တိုက်ရိုက် PCR နည်းပညာဖြစ်သည်။ဤနည်းပညာဆိုင်ရာအခြေအနေအောက်တွင်၊ nucleic acid ကို ခွဲထုတ်ပြီး ထုတ်ယူရန် မလိုအပ်ဘဲ အရာဝတ္ထုအဖြစ် တစ်သျှူးနမူနာကို တိုက်ရိုက်အသုံးပြုကာ PCR တုံ့ပြန်မှုကို လုပ်ဆောင်ရန်အတွက် ပစ်မှတ် gene primers များကို ထည့်ပါ။

ဒုတိယ၊ Direct PCR နည်းပညာသည် သမားရိုးကျ DNA နမူနာပုံစံ ချဲ့ထွင်မှုနည်းပညာတစ်ခုသာမက RNA ပုံစံပြောင်းပြန်ကူးယူခြင်း PCR လည်း ပါဝင်သည်။

တတိယ၊ Direct PCR နည်းပညာသည် တစ်ရှူးနမူနာများတွင် ပုံမှန်အရည်အသွေးရှိသော PCR တုံ့ပြန်မှုများကို တိုက်ရိုက်လုပ်ဆောင်ရုံသာမက၊ Real-Time qPCR တုံ့ပြန်မှုများလည်း ပါ၀င်သည်၊ ၎င်းသည် တုံ့ပြန်မှုစနစ်အား ပြင်းထန်သောနောက်ခံမီးချောင်းများဝင်ရောက်စွက်ဖက်နိုင်စွမ်းရှိရန် လိုအပ်ပြီး endogenous fluorescence သည် ဆန့်ကျင်ဘက်ပြုနိုင်စွမ်းကို ငြိမ်းစေပါသည်။

စတုတ္ထ၊ Direct PCR နည်းပညာဖြင့် ပစ်မှတ်ထားသောနမူနာများသည် နူကလိစ်အက်ဆစ်ပုံစံများကိုသာ ထုတ်လွှတ်ပေးရန် လိုအပ်ပြီး PCR တုံ့ပြန်မှုကို အနှောင့်အယှက်ဖြစ်စေသော ပရိုတင်းများ၊ ပိုလီဆာခရိုက်များ၊ ဆားအိုင်းယွန်းများ စသည်တို့ကို မဖယ်ရှားပါ။ရှုပ်ထွေးသောအခြေအနေများအောက်တွင် အင်ဇိုင်းလုပ်ဆောင်ချက်နှင့် ထပ်တူထပ်မျှတိကျမှုကိုသေချာစေရန် တုံ့ပြန်မှုစနစ်တွင် nucleic acid polymerase နှင့် PCR ရောစပ်ရန်လိုအပ်ပါသည်။

ပဉ္စမအချက်၊ နျူကလိစ်အက်ဆစ်ဖြည့်တင်းခြင်းမရှိဘဲ Direct PCR နည်းပညာဖြင့် ပစ်မှတ်ထားသည့် တစ်ရှူးနမူနာသည် နျူကလိစ်အက်ဆစ်ကြွယ်ဝမှုကို ကုသခြင်းမရှိဘဲ ပုံစံပြား၏ပမာဏသည် အလွန်သေးငယ်သောကြောင့် တုံ့ပြန်မှုစနစ်သည် အလွန်မြင့်မားသော အာရုံခံနိုင်စွမ်းနှင့် ချဲ့ထွင်မှုထိရောက်မှုရှိရန် လိုအပ်သည်။