RNase သည် မကြာခဏ RNA ထုတ်ယူစမ်းသပ်မှုပြုလုပ်သော ကျောင်းသားများစွာ မကြားချင်ကြသည့် ထိလွယ်ရှလွယ်စကားလုံးဖြစ်သည်။လက်နက်အပြည့်အစုံဖြင့် နောက်ဆုံးတွင် အဆိပ်ပြင်းသော ဖီနောနှင့် ကလိုရိုဖောင်ဓာတ်များဖြင့် ထုတ်ယူခဲ့သော RNA သည် ပျက်စီးသွားသည်။ငါ မသင့်မြတ်ဘူး!!!ဒီနေ့တော့ နာမည်ကြီး Rnase ရဲ့ မူလဇစ်မြစ်ကို လေ့လာကြည့်ရအောင်။

Ribonuclease (RNase) သို့မဟုတ် RNase သည် RNA ကို သေးငယ်သော မော်လီကျူးများအဖြစ် ဟိုက်ဒရောလစ်ဖြစ်စေသော နျူကလိယတစ်မျိုးဖြစ်သည်။RNase သည် သေးငယ်သော မော်လီကျူးပရိုတင်းအဖြစ် ပုံမှန်မဟုတ်ဘဲ တည်ငြိမ်သည်။ .သမားရိုးကျ မြင့်မားသော အပူချိန်နှင့် ဖိအားမြင့် ရေနွေးငွေ့ ပိုးသတ်ခြင်း နှင့် ပရိုတင်း တားဆေးများသည် ၎င်းကို လုံးဝ အသက်မသွင်းနိုင်ပါ။RNase ၏တည်ငြိမ်မှုသည်အဓိကအားဖြင့်ဖွဲ့စည်းတည်ဆောက်ပုံရှိ disulfide နှောင်ကြိုးများမှလာသည်။ဥပမာအားဖြင့်၊ ဘော့စ်ပန်ကရိယ၏အသုံးများသော RNase တွင် အမိုင်နိုအက်ဆစ် 124 ခုသာရှိသော်လည်း disulfide နှောင်ကြိုး 4 ခုပါရှိသည်။ဆာလဖာနှောင်ကြိုးနှင့် disulfide နှောင်ကြိုးတို့သည် RNase အား အထူးကောင်းမွန်သော အပူတည်ငြိမ်မှုပေးသည်။ထို့အပြင်၊ rnase သည် သေးငယ်သော မော်လီကျူးအလေးချိန်ရှိပြီး ကိစ္စအများအပြားတွင် ၎င်း၏မူလပုံစံကို လျင်မြန်စွာ ပြန်လည်ရယူနိုင်သည်။

အလွန့်အလွန် တည်ငြိမ်နေသည့်အပြင်၊RNases များသည် ဓာတ်ခွဲခန်းတွင် နေရာအနှံ့တွင်ရှိသည်။ .RNase သည် ဇီဝဗေဒဆိုင်ရာ ကာကွယ်ရေး ယန္တရားတစ်ခုဖြစ်သည်။ဆဲလ်တစ်ခုအတွက်၊ exogenous RNA သည် မကြာခဏဆိုသလို သေဆုံးနိုင်သည်။Exogenous DNA နဲ့ ယှဉ်ရင် exogenous RNA က ပိုအန္တရာယ်များပါတယ်။RNA သည် ပျော်ရွှင်စွာ ကူးယူဖော်ပြပြီး ဘာသာပြန်သောကြောင့် သက်ရှိအားလုံးနီးပါးသည် exogenous RNA ၏ ကျူးကျော်မှုကို ခုခံကာကွယ်ရန်အတွက် RNases များကို ဆင့်ကဲပြောင်းလဲခဲ့ကြသည်။ထို့ကြောင့်၊ ဓာတ်ခွဲခန်းတွင် စိုက်ပျိုးထားသော ဘက်တီးရီးယားဆဲလ်များနှင့် RNA ထုတ်ယူသူများသည် RNase ၏အနံ့ကို ပျံ့နှံ့စေသည်။လူ့ခန္ဓာကိုယ်အရည်များ (တံတွေး၊ မျက်ရည်စသည်) တွင် RNase ပမာဏများစွာပါဝင်သောကြောင့် RNA ပျက်ဆီးသွားသောအခါ မငိုပါနှင့်။ငိုလေလေ RNA ပျက်စီးလေလေဖြစ်သည်။!ညီမ Daiyu သည် RNA ထုတ်ယူမှုအတွက် မသင့်လျော်ပါ။

ထို့အပြင်၊ သင်၏နူးညံ့သောအရေပြားတွင် RNase အများအပြားပါဝင်ပြီး အမှတ်အသားများ၊ ပိုက်ပိုက်များ၊ ရေခဲသေတ္တာတံခါးများနှင့် အရေပြားကိုထိမိသောတံခါးလက်ကိုင်များတွင်လည်း RNase ပါဝင်ပါသည်။

အလွန်များပြားသော ရှုပ်ထွေးမှုများဖြင့် RNases ကို မည်သို့ကိုင်တွယ်ရမည်ကို လေ့လာကြည့်ကြပါစို့။

RNA ကို ဖယ်ထုတ်တဲ့အခါ လူတိုင်းစဉ်းစားမိတဲ့ အရာတစ်ခုပါ။DEPC(Diethyl pyrocarbonate)။DEPC သည် RNase တက်ကြွသောအုပ်စု histidine ၏ imidazole ကွင်းနှင့် ပေါင်းစပ်ခြင်းဖြင့် ပရိုတင်းကို အဓိကအားဖြင့် denatures စေပြီး အင်ဇိုင်း၏လုပ်ဆောင်ချက်ကို ဟန့်တားသည်။0.1% DEPC သည် Rnase ကို ပိုမိုကောင်းမွန်စွာ ဖယ်ရှားပေးနိုင်သော်လည်း၊ DEPC သည် လူသိများသော ကင်ဆာဖြစ်စေသော ဓာတုပစ္စည်းဖြစ်ကြောင်း ကျွန်ုပ်တို့ သတိထားရန် လိုအပ်သောကြောင့် ၎င်းကို အသုံးပြုသည့်အခါ အထူးသတိထားသင့်သည်။

RNase အတွက်၊ ကျွန်ုပ်တို့သည် ရှုထောင့်နှစ်ခုမှ စတင်ရန် လိုအပ်သည်။ပထမအချက်မှာ endogenous RNase ၏လုပ်ဆောင်မှုကို ဟန့်တားရန်ဖြစ်သည်။

Trizol တွင်ပါရှိသော guanidine isothiocyanate နှင့် DTT ကဲ့သို့သော သမားရိုးကျ RNA ထုတ်ယူသည့် ဓာတ်ပစ္စည်းများသည် RNase ၏ disulfide နှောင်ကြိုးကို ဖွင့်ပေးနိုင်သော်လည်း၊ အထူးသဖြင့် တစ်ရှူးနမူနာများတွင် အချို့သော RNases ရှိနေသေးသောကြောင့် အပူချိန်နိမ့်စေရန် အာရုံစိုက်ပါ။

၁။တစ်ရှူးနမူနာကို ထုတ်ယူပြီးနောက် နိုက်ထရိုဂျင်အရည်တွင် သို့မဟုတ် စီးပွားဖြစ် RNA ထိန်းသိမ်းမှုဖြေရှင်းချက်တွင် ချက်ခြင်းနှစ်မြှုပ်ပါ။

၂။ဆဲလ်နမူနာ၏ RNA ကို ထုတ်ယူပြီးနောက်၊ ၎င်းကို lysis solution ထဲသို့ထည့်ကာ ရေခဲသေတ္တာပေါ်တွင် lyse လုပ်ပါ။

3. ကြိတ်ခွဲရန်အတွက် နိုက်ထရိုဂျင်အရည်ကို အသုံးပြုခြင်းသည် အကောင်းဆုံးဖြစ်သည်။ တစ်ရှူးနမူနာများကို တစ်သားတည်းဖြစ်စေသောအခါ။နိုက်ထရိုဂျင်အရည်မပါသော လျှပ်စစ် homogenizer ကိုအသုံးပြုသောအခါ၊ homogenate adapter ကို အပြည့်အဝအအေးမကြိုရန် ဂရုပြုပါ။

ဒုတိယတစ်မျိုးမှာ Exogenous DNase ဖြစ်သည်။

၁။လက်နက်ကိုင်ဆောင်ထားပြီး၊ ဓာတ်ခွဲခန်းအင်္ကျီဝတ်၊ မျက်နှာဖုံးစွပ်ပြီး လက်အိတ်အသစ်တစ်စုံကို သေချာဝတ်ဆင်ပါ (ဒီလောက်ထိ ခြွေတာမနေပါနဲ့!! Trizol က အလွန်အဆိပ်သင့်ပြီး လက်အိတ်က အရမ်းပြင်းထန်တဲ့အတွက် လက်အိတ်ကို မစိုစေနဲ့)။

၂။အသုံးပြုထားသော pipette အကြံပြုချက်များ၊ EP tubes၊ PCR tubes နှင့် အခြားသော ပစ္စည်းအားလုံးကို de-RNase ဖြင့် ကုသရပါမည်။၎င်းကို 0.1% DEPC တွင်စိမ်ပြီး မြင့်မားသောဖိအားအောက်တွင် ဖိအားပေးနိုင်ပါသည်။မီးခိုးငွေ့ခေါင်းစွပ်အတွင်း လည်ပတ်မှုကို ဂရုပြုပါ။ဒေသခံအာဏာရှင်များသည် အင်ဇိုင်းများကိုဖယ်ရှားရန်အတွက် လူသုံးကုန်များကို တိုက်ရိုက်ဝယ်ယူနိုင်သည်။

PS: ပျင်းတဲ့နည်းကို ပြောပြမယ်။မြင့်မားသော အပူချိန်နှင့် ဖိအားများ သည် RNase ကို လုံးလုံးလျားလျား မဖယ်ရှားနိုင်သော်လည်း၊ ၎င်းသည် ၎င်း၏ အစိတ်အပိုင်း အများအပြားကို ဖယ်ရှားပေးလိမ့်မည်။မြင့်မားသော အပူချိန် နှင့် ဖိအား 2 ဆ သည် ကောင်းမွန်သော အကျိုးသက်ရောက်မှု ရှိပြီး RNA ၏ ထုတ်ယူမှုသည် အနည်းငယ်သာ သက်ရောက်မှု ရှိပါသည်။

၃။အရက်သည် ပရိုတင်းဓာတ်ကို ဖြစ်ပေါ်စေနိုင်သည်၊ဒါကြောင့် RNA ထုတ်ယူတဲ့ဇယားကို အရက် 75% နဲ့ သုတ်ပေးနိုင်ပါတယ်။ ပြီးတော့ လက်အိတ်တွေကိုလည်း အရက်နဲ့ ဖျန်းနိုင်ပါတယ်။

၄။နောက်ဆုံး RNA ပျော်ဝင်သည့်အဖြေနှင့် centrifuge tube ကိုလည်း de-RNase ဖြင့် ကုသသင့်သည်။DEPC ရေသည် အသုံးများသော RNA ပျော်ဝင်သည့်ဖြေရှင်းချက်ဖြစ်သည်။DEPC ရေ၏မှန်ကန်သောပြင်ဆင်မှုနည်းလမ်းအကြောင်း ဆွေးနွေးကြပါစို့ (သင်ဝယ်သောအခါတွင် စီးပွားဖြစ် DEPC ကို ပြန်လည်ထုပ်ပိုးရန် မမေ့ပါနှင့်)

1:1000 တွင် အလွန်သန့်စင်သောရေထဲသို့ DEPC ကိုထည့်ပါ၊ ကောင်းစွာလှုပ်ခါပြီး 37°C တွင် တစ်ညနေထားကာ အပူချိန်မြင့်မြင့်နှင့် ဖိအားများအောက်တွင် 121°C တွင် ပိုးသတ်ပါ။DEPC ရေကို 1ml aliquots တွင် -20°C တွင် သိမ်းဆည်းနိုင်ပါသည်။

နိဂုံးချုပ်ပြောရလျှင်- အပူချိန်နိမ့်ခြင်းသည် အဓိကဖြစ်ပြီး၊ စားသုံးနိုင်သောပစ္စည်းများကို ကောင်းမွန်စွာကိုင်တွယ်ပြီး၊ လက်နက်အပြည့်အစုံနှင့် စကားပြောနည်းပါသည်။

အင်း၊ ဒီနေ့ နည်းဗျူဟာအတွက် ဒါပဲ။သင်ဖော်ပြခဲ့သော RNA အာရုံစူးစိုက်မှုနှင့် သန့်ရှင်းမှုအားလုံးကို ကျွန်ုပ်ဆုတောင်းပါသည်။A260/A280 နှစ်ခုစလုံးသည် 2.0 ဖြစ်သည်။!!

သုံးတာတော့ ဟုတ်ပါတယ်။အခန်းအပူချိန်လည်ပတ်မှု RNA ထုတ်ယူမှုကိရိယာအထက်ဖော်ပြပါ ဒုက္ခများကို ကြုံတွေ့ရနိုင်မည်မဟုတ်ပေ။

DNase မထည့်ဘဲ အခန်းအပူချိန်တွင် လုပ်ဆောင်ခြင်းသည် ဆဲလ်များမှ စုစုပေါင်း RNA ကို 11 မိနစ်အတွင်း ထုတ်ယူပြီး တိရစ္ဆာန်တစ်ရှူးများ သို့မဟုတ် အပင်များမှ စုစုပေါင်း RNA ကို မိနစ် 30 အတွင်း ထုတ်ယူသည်။

စမ်းသပ်မှုနမူနာများအတွက်၊ ကျေးဇူးပြု၍ ဆက်သွယ်ပါ။overseas@foregene.com

ဆက်စပ်ထုတ်ကုန်များ-

https://www.foreivd.com/cell-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/plant-total-rna/