Glue Recovery ကို တိုးတက်စေခြင်းအတွက် အကြံပြုချက်များ

1. electrophoresis ကာလအတွင်း နမူနာဝန်ကို တိုးပေးပါ။

2. အသစ်ပြင်ဆင်ထားသော electrophoresis ကြားခံကိုသုံးပါ။

3. ကော်ဖြတ်သည့်အခါ၊ ကော်ဖြတ်ခြင်း၏ထုထည်ကိုလျှော့ချရန် ကော်တုံးများကိုသာဖြတ်ရန်ကြိုးစားပါ- ရည်ရွယ်ချက်အနည်းငယ်ရှိသော အပိုင်းအစများပါသော ကော်မလိုအပ်ပါ၊ မဟုတ်ပါက ပြန်လည်ရယူနှုန်းကို ထိခိုက်စေမည်ဖြစ်ပါသည်။

4. ကော်နှစ်ပိုင်း သို့မဟုတ် ထို့ထက်ပို၍ အရည်ပျော်ပြီးနောက် ထုထည်မည်မျှကြီးမားစေကာမူ ပြွန်တစ်ခုကို အသုံးပြုပြီး ကော်လံတစ်ခုတည်းသို့ လွှဲပြောင်းပါ။

5. Sol တွင်ထည့်သွင်းထားသောဖြေရှင်းချက်သည်အနည်းငယ်ပိုနိုင်ပြီး၊ ၎င်းသည် DNA ၏အမြှေးပါးနှင့်ချိတ်ဆက်မှုကိုပိုမိုအဆင်ပြေစေသည်၊ သို့သော်ယေဘုယျအားဖြင့် 750ul ထက်မပိုပါ။

6. ဂျယ်လ်ပြန်လည်ရယူခြင်း၏သော့ချက်မှာ ကော်လံအတွင်းရှိ ဆားပါဝင်မှု၊ အက်စစ်ဓာတ် (အားသွင်းမှု) နှင့် ကော်လံအတွင်းရှိ ဖြေရှင်းချက်၏ hydrophobicity တို့မှတစ်ဆင့် DNA ကို ကော်လံတွင် ချည်နှောင်ရန်ဖြစ်သည်။ထို့ကြောင့်၊ electrophoresis ကြားခံ၏ pH မြင့်မားပါက၊ 10ul (pH 5.0၊ 3mol/L NaAC) ကို ဆိုးလ်သို့ ထည့်နိုင်သည်။အမြှေးပါးပေါ်ရှိ DNA မော်လီကျူးများကို ပိုမိုကောင်းမွန်စွာ ကြားဖြတ်နိုင်ရန်၊ ကော်ကိုပျော်ပြီးနောက် အရည်ထဲသို့ 30% isopropanol ကို အပူအဖြစ်ထည့်နိုင်သည်။

7. အီသနောကို အပြည့်အ၀အငွေ့ပျံစေရန် ကော်လံကို အခန်းအပူချိန်တွင် မိနစ်အနည်းငယ် (၁၀ မိနစ်ခန့်) ထားလိုက်ပါ။

8. နောက်ဆုံးတွင်၊ ပြန်လည်ရယူခြင်းပမာဏကို လျှော့ချရန် သာလွန်ကောင်းမွန်မှုကို လျှော့ထည့်ပါ။ယေဘူယျအားဖြင့်၊ 30-50μl eluent ကို elution အတွက်အသုံးပြုသည် (အနည်းငယ်မျှသာမဟုတ်ပါက၊ elution အတွက်မသင့်လျော်သောအမြှေးပါးကိုစိုစွတ်စေလိမ့်မည်မဟုတ်ပါ);elution droplets များသည် အမြှေးပါး၏ အလယ်ဗဟိုတွင်ရှိပြီး အမြှေးပါးနှင့် ချိတ်ဆက်ထားသော DNA ကို အပြည့်အဝဖော်ပြရန်။

၉။ ပစ္စည်းကို ပေါင်းထည့်ပြီးနောက်၊ ၎င်းကို ၅၅ ဒီဂရီ ရေချိုးခန်းတွင် ၅ မိနစ်ကြာ သို့မဟုတ် ၅၀ ဒီဂရီ ရေချိုးခန်းတွင် ၁၀ မိနစ်ထက်ပို၍ ထားနိုင်သည် သို့မဟုတ် တစ်ညလုံး အပူချိန် ၄ ဒီဂရီတွင် parafilm ဖြင့် အလုံပိတ်ပြီးနောက် နောက်တစ်နေ့တွင် ပြန်လည်ရရှိရန်အတွက် centrifuged ပြုလုပ်နိုင်သည်၊ အကျိုးသက်ရောက်မှုသည် ကောင်းမွန်ပါသည်။

10. centrifuged eluate ကို adsorption ကော်လံသို့ ပြန်ထည့်ကာ centrifuge တစ်ဖန်။

PCR ထုတ်ကုန်ပြန်လည်ရယူခြင်းအတွက် အသေးစိတ်နည်းလမ်းများနှင့် လုပ်ထုံးလုပ်နည်းများ

1. သာမန်ရော်ဘာပြန်လည်အသုံးပြုခြင်း။

အကယ်၍ သင်သည် ကော်ကို ပြန်လည်ရယူလိုပါက၊ အဆင်ပြေပြီး အနည်းငယ်ပိုမြင့်သော ပြန်လည်နာလန်ထမှုနှုန်းရှိသည့် အစုံကို အသုံးပြုခြင်းသည် အကောင်းဆုံးဖြစ်သည်။အကယ်၍ သင်သည် ၎င်းကို ကိုယ်တိုင်ပြန်လည်ရယူရန် အမှန်တကယ် လိုအပ်ပါက၊ သင်သည် ကော်ကိုဖြတ်ပြီးနောက် TE ၏ ထုထည် ၃ ဆကို ပေါင်းထည့်နိုင်သည်။ရေချိုးခန်းထဲတွင် အရည်ပျော်ပြီးနောက်၊ ဖီနော၊ ဖီနော၊ ကလိုရိုဖောင်များကို သန့်စင်စွာ ထုတ်ယူပြီး အီသနောကို ရွာသွန်းစေသည်။ဒါပဲ။

2. အရည်ပျော်မှတ်နိမ့်ဂျယ်များမှ DNA ပြန်လည်ရယူခြင်း။

DNA အပိုင်းအစများကို သန့်စင်ခြင်း TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8.0, 0.1 mmol/l EDTA) ကို ဂျယ်၏ ထုထည်နှင့် ညီမျှအောင် ပေါင်းထည့်ကာ 65°C ရေချိုးခန်းထဲတွင် ဂျယ်ကို လုံးလုံးပျော်စေရန် 5 မိနစ်ကြာ ထားပေးပါ။

၎င်းကို အခန်းအပူချိန်သို့ ပို့ဆောင်ပြီးနောက်၊ phenol ပမာဏ (TE နှင့် ပြည့်ဝသော၊ TE သည် အပေါ်လွှာတွင် အလုံပိတ်၊ ဖီနော၏ အောက်အလွှာကို ဖယ်ရှားခဲ့သည်) ထည့်ပြီး အရောအနှောကို ညင်သာစွာ ရောစပ်ပြီး (ရောစပ်ရန် မလိုအပ်ပါ) နှင့် 12,000 rpm တွင် centrifuged လုပ်ပါ။1-2 ကြိမ်ပြန်လုပ်ပါ။

supernatant ကိုယူပြီး၊ 3mol/L ဆိုဒီယမ် acetate (pH 5.2) ၏ 0.1 ပမာဏနှင့် အီသနောမိုးရွာသွန်းမှုကို ဆောင်ရွက်ရန် အကြွင်းမဲ့ အီသနော၏ 2.5 ဆ ပမာဏကို ပေါင်းထည့်ပါ။သန့်စင်ထားသော DNA ကို သင့်လျော်သော TE ပမာဏဖြင့် ဖျက်သိမ်းပြီး အကြောင်းအရာကို တိုင်းတာပြီး အသုံးပြုရန် ပြင်ဆင်ပါ (၎င်းကို ပစ်မှတ် ဗီဇဖွဲ့စည်းပုံ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှု၊ စုံစမ်းစစ်ဆေးမှု ပြင်ဆင်မှု စသည်ဖြင့်) အသုံးပြုနိုင်သည်။

3. ကောင်းမွန်သော amplification တိကျမှုနှင့်အတူ PCR ပြန်လည်ရယူခြင်း။

PCR ချဲ့ထွင်မှု၏ သီးခြားထူးခြားချက်ကောင်းပါက၊ ၎င်းသည် PCR ထုတ်ကုန်၏ ရိုးရှင်းသောသန့်စင်မှုနှင့် ပြန်လည်ရယူခြင်းတစ်ခုမျှသာဖြစ်သည်။PCR ထုတ်ကုန်တွင် 50ug/ml ပရိုတင်း K ကိုထည့်နိုင်ပြီး၊ 1 နာရီအတွက် 37 ဒီဂရီ၊ phenol/chloroform ဖြင့် တစ်ကြိမ်ထုတ်ယူ၊ chloroform ဖြင့် တစ်ကြိမ်ထုတ်ယူနိုင်ပြီး supernatant ၏ 0.1 ပမာဏကို ထည့်နိုင်သည်။အကြွင်းမဲ့ အီသနော ပမာဏ 2.5 ဖြင့် မိုးရွာခြင်းဖြင့် ဆိုဒီယမ် acetate ကို ပြန်လည်ရရှိခဲ့သည်။

ဆက်စပ်ထုတ်ကုန်များ-

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/