pipette tips နှင့် EP tubes စသည်တို့ကို ပိုးသတ်ခြင်း

1. 0.1% (တစ်ထောင်) DEPC (အလွန်အမင်း အဆိပ်သင့်သော အရာ) ကို ဒိုင်းယွန်းပြုထားသော ရေဖြင့် ပြင်ဆင်ပါ၊ ၎င်းကို မီးခိုးငွေ့ဖြင့် ဂရုတစိုက်အသုံးပြုကာ အလင်းရောင်မှ 4°C တွင် သိမ်းဆည်းပါ။

DEPC ရေသည် DEPC ဖြင့် သန့်စင်သောရေဖြစ်ပြီး မြင့်မားသောအပူချိန်နှင့် ဖိအားမြင့်ခြင်းဖြင့် ပိုးသတ်ထားသောရေဖြစ်သည်။RNase၊ DNase နှင့် proteinase ကင်းစင်ရန် စမ်းသပ်ခဲ့သည်။

2. pipette tip နှင့် EP tube ကို 0.1% DEPC ထဲသို့ ထည့်ပြီး pipette tip နှင့် EP tube ကို 0.1% DEP ဖြင့်ဖြည့်ထားကြောင်း သေချာပါစေ။

၃။ အလင်းရောင်မှ ကာကွယ်ပါ၊ တစ်ညလုံး မတ်တပ်ရပ်ပါ (၁၂-၂၄ နာရီ)

4. ထိပ်ဖျားနှင့် EP ပြွန်ပါရှိသောသေတ္တာကို DEPC တွင်စိမ်ရန်မလိုအပ်ပါ။ထိပ်ဖျား သို့မဟုတ် EP ပြွန်အတွင်းရှိ DEPC ရေကို အကြမ်းဖျင်း ဖယ်ရှားပြီးနောက်၊ ၎င်းကို ထုပ်ပိုးပြီး ထုပ်ပိုးပါ။

5. 121 ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်, 30min

6. 180 ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်၊ နာရီပေါင်းများစွာ အခြောက်ခံ (အနည်းဆုံး 3 နာရီ)၊

မှတ်ချက်- a.DEPC ကို ကိုင်တွယ်သည့်အခါ စေးလက်အိတ်များနှင့် နှာခေါင်းစည်းများ ဝတ်ဆင်ပါ။b၊ သို့မဟုတ် DEPC ပိုးမွှားကင်းစင်ခြင်း၊ 130 ℃၊ 90min အော်တိုကလက် (ဓာတ်ခွဲခန်းများစွာတွင် အပူချိန်မြင့်ပိုးသတ်ခြင်း နှစ်ကြိမ်)

RNA ထုတ်ယူခြင်းဆိုင်ရာ ထည့်သွင်းစဉ်းစားမှုများ

တစ်ရှူး RNA အထီးကျန်မှု ပျက်ကွက်ခြင်း၏ အဓိက ဖြစ်စဉ်နှစ်ခု

RNA ပျက်စီးခြင်းနှင့် တစ်ရှူးများရှိ အညစ်အကြေးအကြွင်းအကျန်များ၊ပျက်စီးခြင်းနှင့်ပတ်သက်၍၊ ယဉ်ကျေးမှုဆဲလ်များမှ ထုတ်ယူထားသော RNA သည် အဘယ်ကြောင့် အလွယ်တကူ မပျက်စီးနိုင်သည်ကို လေ့လာကြည့်ကြပါစို့။လက်ရှိ RNA ထုတ်ယူသည့် ဓာတ်ပစ္စည်းများအားလုံးတွင် RNase ကို လျင်မြန်စွာ ဟန့်တားသည့် အစိတ်အပိုင်းများ ပါဝင်သည်။ယဉ်ကျေးသောဆဲလ်များထဲသို့ lysate ထည့်ပြီး ရောမွှေလိုက်ရုံဖြင့် ဆဲလ်အားလုံးကို lysate နှင့် နှိုက်နှိုက်ချွတ်ချွတ် ရောစပ်နိုင်ပြီး ဆဲလ်များကို လုံးဝ lysed စေသည်။ဆဲလ်များကို lysed ပြီးနောက်၊ lysate တွင်တက်ကြွသောပါဝင်ပစ္စည်းများသည် intracellular RNase ကိုချက်ချင်းတားဆီးသည်၊ ထို့ကြောင့် RNA သည်နဂိုအတိုင်းဖြစ်သည်။ဆိုလိုသည်မှာ၊ မွေးမြူထားသောဆဲလ်များသည် lysate နှင့် လွယ်ကူစွာ အပြည့်အ၀ ဆက်သွယ်နိုင်သောကြောင့် ၎င်းတို့၏ RNA သည် အလွယ်တကူ မပျက်စီးနိုင်ပါ။တစ်ဖက်တွင်၊ တစ်ရှူးရှိ RNA သည် တစ်သျှူးရှိဆဲလ်များသည် lysate ကို လျင်မြန်စွာ ဆက်သွယ်ရန် မလွယ်ကူသောကြောင့် ပျက်ဆီးသွားနိုင်သည်။လုံလောက်သော အဆက်အသွယ်ကြောင့်ဒီတော့၊RNA လုပ်ဆောင်ချက်ကို ဟန့်တားနေချိန်တွင် တစ်သျှူးများကို ဆဲလ်တစ်ခုတည်းအဖြစ်သို့ ပြောင်းလဲရန် နည်းလမ်းရှိနေသည်ဟု ယူဆပါက၊ ပျက်စီးခြင်းပြဿနာကို လုံးဝဖြေရှင်းနိုင်မည်ဖြစ်သည်။

နိုက်ထရိုဂျင်အရည်ကြိတ်ခြင်းသည် အထိရောက်ဆုံးနည်းလမ်းဖြစ်သည်။သို့ရာတွင်၊ နိုက်ထရိုဂျင်အရည် ကြိတ်ခွဲသည့်နည်းလမ်းသည် အထူးသဖြင့် နမူနာအရေအတွက် များပြားသောအခါတွင် အလွန်ဒုက္ခရောက်ပါသည်။ယင်းက နောက်ထပ်အကောင်းဆုံးအရာ- homogenizer ကိုဖြစ်ပေါ်စေသည်။ဟိhomogenizerဆဲလ်များသည် lysate နှင့်မဆက်သွယ်မီ RNase လှုပ်ရှားမှုကိုမည်ကဲ့သို့ ဟန့်တားထားသနည်းဟူသည့်မေးခွန်းကို နည်းလမ်းမစဉ်းစားဘဲ၊ တစ်သျှူးများနှောင့်ယှက်မှုနှုန်းသည် အတွင်းဆဲလ် RNase ၏ RN ကို ကျဆင်းစေသည့်နှုန်းထက် ပိုမြန်ကြောင်း ဆုတောင်းပါသည်။

electric homogenizer ၏ အာနိသင်က ပိုကောင်းသည်၊glass homogenizer ၏အကျိုးသက်ရောက်မှုသည် ညံ့ဖျင်းသော်လည်း ယေဘူယျအားဖြင့်၊ homogenizer နည်းလမ်းသည် ပျက်စီးခြင်းဖြစ်စဉ်ကို မကာကွယ်နိုင်ပါ။ထို့ကြောင့် ထုတ်ယူမှု ပျက်စီးသွားပါက၊ နိုက်ထရိုဂျင်အရည်ဖြင့် ကြိတ်ခွဲရန်အတွက် မူလလျှပ်စစ် homogenizer ကို အသုံးပြုသင့်သည်။မူလဖန်သားတူရိယာကို လျှပ်စစ် homogenizer အဖြစ်သို့ ပြောင်းလဲသင့်သည် သို့မဟုတ် နိုက်ထရိုဂျင်အရည်ဖြင့် တိုက်ရိုက်ကြိတ်ပါ။ပြဿနာက 100% နီးပါး ဖြစ်နိုင်တယ်။ဖြေရှင်းပါ။

နောက်ဆက်တွဲစမ်းသပ်မှုများအပေါ် သက်ရောက်သည့် မသန့်ရှင်းမှု အကြွင်းအကျန်ပြဿနာသည် ပျက်စီးခြင်းထက် ပိုမိုကွဲပြားသော အကြောင်းရင်းများ ရှိပြီး ဖြေရှင်းနည်းများသည် တူညီပါသည်။နိဂုံးချုပ်အားဖြင့်,တစ်ရှူးတွင် ဆွေးမြေ့ခြင်း သို့မဟုတ် ကျန်အညစ်အကြေးများရှိနေပါက၊ သီးခြားစမ်းသပ်ပစ္စည်းအတွက် ထုတ်ယူသည့်နည်းလမ်း/ဓာတ်ပြုခြင်းကို အကောင်းဆုံးဖြစ်အောင် လုပ်ဆောင်ရပါမည်။ပိုမိုကောင်းမွန်အောင်ပြုလုပ်ရန် သင့်အဖိုးတန်နမူနာများကို အသုံးပြုရန် မလိုအပ်ပါ- စျေးကွက်မှ ငါး/ကြက်ကဲ့သို့သော တိရစ္ဆာန်ငယ်အချို့ကို ဝယ်ယူနိုင်သည်၊ RNA ထုတ်ယူရန်အတွက် သက်ဆိုင်ရာပစ္စည်း၏အစိတ်အပိုင်းကိုယူကာ ပရိုတင်းထုတ်ယူရန်အတွက် အခြားအစိတ်အပိုင်းကို ပါးစပ်၊ အစာအိမ်နှင့် အူလမ်းကြောင်းဖြင့် ကြိတ်ချေနိုင်သည်။

ထုတ်ယူထားသော RNA ၏ ပစ်မှတ် RNA ကို မတူညီသော နောက်ဆက်တွဲ စမ်းသပ်မှုများ အတွက် အသုံးပြုပြီး ၎င်း၏ အရည်အသွေး လိုအပ်ချက်များမှာ ကွဲပြားပါသည်။

cDNA စာကြည့်တိုက်တည်ဆောက်မှုတွင် အင်ဇိုင်းတုံ့ပြန်မှုတားဆေးများ အကြွင်းအကျန်မရှိဘဲ RNA သမာဓိရှိရန် လိုအပ်သည်။မြောက်ပိုင်းသည် ပိုမိုမြင့်မားသော RNA သမာဓိရှိရန် လိုအပ်ပြီး အင်ဇိုင်းတုံ့ပြန်မှုတားဆီးပေးသည့် အကြွင်းအကျန်များအတွက် အောက်ပိုင်းလိုအပ်ချက်များ၊RT-PCR သည် အလွန်မြင့်မားသော RNA ခိုင်မာမှုမလိုအပ်ပါ။သို့သော် အင်ဇိုင်းတုံ့ပြန်မှုကို ဟန့်တားသည်။အကြွင်းအကျန်လိုအပ်ချက်များသည် တင်းကျပ်သည်။input သည် output ကိုဆုံးဖြတ်သည်;ရည်မှန်းချက်က အမြင့်ဆုံးသန့်စင်တဲ့ RNA ကိုရရှိဖို့ အချိန်တိုင်း၊ လူတွေနဲ့ ငွေကုန်ကြေးကျများလိမ့်မယ်။

နမူနာများ စုဆောင်းခြင်း/သိမ်းဆည်းခြင်း။

ပြိုကျပျက်စီးခြင်းကို ထိခိုက်စေသည့် အချက်များ နမူနာသည် သက်ရှိခန္ဓာကိုယ်/သို့မဟုတ် မူလကြီးထွားမှုပတ်ဝန်းကျင်မှ ထွက်ခွာသွားပြီးနောက်၊ နမူနာရှိ endogenous အင်ဇိုင်းများသည် RNA ကို စတင်ပြိုကွဲသွားလိမ့်မည်၊နှင့် ဆွေးမြေ့မှုနှုန်းသည် endogenous အင်ဇိုင်းများ နှင့် အပူချိန်တို့ နှင့် ဆက်စပ်နေသည်။အစဉ်အလာအရ၊ endogenous အင်ဇိုင်းလုပ်ဆောင်ချက်ကို လုံးလုံးလျားလျား ဟန့်တားရန် နည်းလမ်းနှစ်ခုသာ ရှိသည်- lysate ကိုချက်ချင်းထည့်ကာ နှိုက်နှိုက်ချွတ်ချွတ်နှင့် လျင်မြန်စွာ တစ်သားတည်းဖြစ်အောင် ပြုလုပ်ပါ။အတုံးသေးသေးလေးတွေ ဖြတ်ပြီး နိုက်ထရိုဂျင်အရည်ထဲမှာ ချက်ချင်း အေးခဲသွားတယ်။ချဉ်းကပ်မှုနှစ်ခုစလုံးသည် လျင်မြန်သောလည်ပတ်မှု လိုအပ်သည်။နမူနာအားလုံးအတွက် သင့်လျော်သော်လည်း ယခင်ပုံစံသည် ဆဲလ်များနှင့် endogenous အင်ဇိုင်းပါဝင်မှုနည်းသော တစ်ရှူးများအတွက်သာ သင့်လျော်ပြီး တစ်သားတည်းဖြစ်တည်ရန် ပိုမိုလွယ်ကူသည်။အထူးသဖြင့်၊ အပင်တစ်သျှူးများ၊ အသည်း၊ စမုန်ဖြူ၊ ပန်ကရိယ၊ သရက်ရွက်၊ ဦးနှောက်၊ အဆီ၊ ကြွက်သားတစ်သျှူးစသည်များကို ဆက်လက်မလုပ်ဆောင်မီ နိုက်ထရိုဂျင်အရည်ဖြင့် အေးခဲစေပါသည်။

နမူနာများကို အပိုင်းပိုင်းခွဲခြင်းနှင့် တစ်သားတည်းဖြစ်စေခြင်း။

ပျက်စီးယိုယွင်းခြင်းနှင့် အထွက်နှုန်းကို ထိခိုက်စေသော အကြောင်းရင်းများသည် နမူနာအကွဲကွဲအပြားပြား ဖြစ်ပါ သည်။နှံ့စပ်အောင်လုပ်ဆောင်ရန်RNA ၏ ပြီးပြည့်စုံသော ထုတ်လွှတ်မှုအတွက်ဖြစ်သည်။ဆဲလ်များကို မကွဲဘဲ တိုက်ရိုက် တစ်သားတည်းဖြစ်စေနိုင်သည်။ကျိုးပြီးမှသာ တစ်ရှူးများကို တစ်သားတည်းဖြစ်စေနိုင်သည်။တဆေးနှင့် ဘက်တီးရီးယားများကို တစ်သားတည်းဖြစ်အောင် မလုပ်ဆောင်မီ သက်ဆိုင်ရာ အင်ဇိုင်းများနှင့် ကွဲရန် လိုအပ်ပါသည်။အင်ဇိုင်းပါဝင်မှုနည်းပြီး လွယ်ကူစွာ တစ်သားတည်းဖြစ်တည်ခြင်းရှိသော တစ်ရှူးများကို lysate တွင် တစ်ကြိမ်တည်းတွင် ကြေမွပြီး တစ်သားတည်းဖြစ်စေနိုင်သည်။အပင်တစ်သျှူး၊ အသည်း၊ စမုန်ဖြူ၊ ပန်ကရိယ၊ သရက်ရွက်၊ ဦးနှောက်၊ အဆီ၊ ကြွက်သားတစ်သျှူးနှင့် အခြားနမူနာများ၊ ၎င်းတို့သည် endogenous အင်ဇိုင်းများ မြင့်မားသော်လည်း တစ်သားတည်းဖြစ်ရန် လွယ်ကူခြင်းမရှိပါ။ထို့ကြောင့် တစ်သျှူးများ ပြတ်တောက်ခြင်းနှင့် တစ်သားတည်းဖြစ်ခြင်းကို သီးခြားစီ လုပ်ဆောင်ရပါမည်။.အကွဲကွဲအပြားပြားပြုလုပ်ခြင်း၏ အယုံကြည်ရဆုံးနှင့် အကျိုးအရှိဆုံးနည်းလမ်းမှာ နိုက်ထရိုဂျင်အရည်ဖြင့် ကြိတ်ခြင်းဖြစ်ပြီး ရောနှောခြင်း၏ ယုံကြည်စိတ်ချရဆုံးနည်းလမ်းမှာ လျှပ်စစ် homogenizer ကိုအသုံးပြုခြင်းဖြစ်သည်။အရည်နိုက်ထရိုဂျင်ဖြင့် ကြိတ်ခွဲခြင်းဆိုင်ရာ အထူးမှတ်စု- ကြိတ်ခွဲခြင်းလုပ်ငန်းစဉ်တစ်ခုလုံးတွင် နမူနာအား ရောနှောခြင်းမပြုရပါ။ အေးခဲသောအခါတွင် endogenous အင်ဇိုင်းများသည် လုပ်ဆောင်နိုင်ခြေပိုများသောကြောင့်၊

Lysate ၏ရွေးချယ်မှု

လည်ပတ်မှုအဆင်ပြေစေရန်နှင့် ကျန်ရှိသော endogenous အညစ်အကြေးများ၏ အကြောင်းရင်းများကို ထိခိုက်စေသော အသုံးများသော lysis solutions များသည် RNase ၏လုပ်ဆောင်ချက်ကို နီးပါးဟန့်တားနိုင်သည်။ထို့ကြောင့်၊ lysis ဖြေရှင်းချက်ရွေးချယ်ရာတွင် အဓိကအချက်မှာ သန့်စင်သည့်နည်းလမ်းနှင့် ပေါင်းစပ်စဉ်းစားရန်ဖြစ်သည်။ခြွင်းချက်တစ်ခုရှိပါသည်-endogenous အင်ဇိုင်းပါဝင်မှုမြင့်မားသောနမူနာများကို endogenous အင်ဇိုင်းများအသက်သွင်းနိုင်စွမ်းကိုတိုးမြင့်ရန် phenol ပါဝင်သော lysate ကိုအသုံးပြုရန်အကြံပြုထားသည်။

သန့်စင်မှုနည်းလမ်းရွေးချယ်မှု

ကျန်ရှိသော endogenous အညစ်အကြေးများကို ထိခိုက်စေသည့်အချက်များ၊ ထုတ်ယူမှုမြန်နှုန်း ဆဲလ်များကဲ့သို့သော သန့်ရှင်းသောနမူနာများအတွက်၊ လက်ထဲတွင် မည်သည့်သန့်စင်မှုနည်းလမ်းဖြင့်မဆို ကျေနပ်လောက်သောရလဒ်များကို ရရှိနိုင်ပါသည်။သို့သော် အခြားနမူနာများစွာ၊ အထူးသဖြင့် အပင်များ၊ အသည်း၊ ဘက်တီးရီးယား စသည်တို့ကဲ့သို့သော အညစ်အကြေးများ မြင့်မားသောသူများအတွက် သင့်လျော်သော သန့်စင်သည့်နည်းလမ်းကို ရွေးချယ်ခြင်းသည် အရေးကြီးပါသည်။ကော်လံ centrifugal သန့်စင်မှုနည်းလမ်းသည် လျင်မြန်စွာ ထုတ်ယူမှု မြန်ဆန်ပြီး RNA ၏ နောက်ဆက်တွဲ အင်ဇိုင်းတုံ့ပြန်မှုအပေါ် သက်ရောက်မှုရှိသော အညစ်အကြေးများကို ထိရောက်စွာ ဖယ်ရှားနိုင်သော်လည်း စျေးကြီးသည် (Foregene သည် ကုန်ကျစရိတ်သက်သာသော ကိရိယာများကို ပေးဆောင်နိုင်သည်၊ အသေးစိတ်အချက်အလက်များကို နှိပ်ပါ။ဒီမှာ);LiCl မိုးရွာသွန်းခြင်းကဲ့သို့ ချွေတာသော နှင့် ဂန္ထဝင် သန့်စင်မှုနည်းလမ်းများကို အသုံးပြု၍ ကျေနပ်ဖွယ်ရလဒ်များကို ရရှိနိုင်သော်လည်း လည်ပတ်ချိန်သည် ရှည်သည်။.

RNA ထုတ်ယူမှုအတွက် "စည်းကမ်းသုံးချက်နှင့် အာရုံရှစ်ပါး"

စည်းကမ်း ၁-exogenous အင်ဇိုင်းများ ညစ်ညမ်းမှုကို အဆုံးသတ်စေပါ။

မှတ်ချက် 1-နှာခေါင်းစည်းများနှင့် လက်အိတ်များကို တင်းကြပ်စွာဝတ်ဆင်ပါ။

မှတ်ချက် 2-အာရုံခံပြွန်များ၊ ထိပ်ဖျားခေါင်းများ၊ ပိုက်ချောင်းများ၊ electrophoresis ကန်များနှင့် စမ်းသပ်မှုတွင်ပါရှိသော စမ်းသပ်ခုံတန်းများကို သေချာစွာစွန့်ပစ်သင့်သည်။

မှတ်စု ၃-စမ်းသပ်မှုတွင် ပါဝင်သော ဓာတ်ပစ္စည်းများ/ဖြေရှင်းချက်များ အထူးသဖြင့် ရေသည် RNase ကင်းစင်ရပါမည်။

စည်းကမ်း 2-endogenous အင်ဇိုင်းများ၏လုပ်ဆောင်မှုကိုပိတ်ဆို့

မှတ်စု 4-သင့်လျော်သော တစ်သားတည်းဖြစ်ခြင်းနည်းလမ်းကို ရွေးချယ်ပါ။

မှတ်ချက် 5-သင့်လျော်သော Lysate ကိုရွေးချယ်ပါ။

မှတ်ချက် 6-နမူနာ၏အစပမာဏကို ထိန်းချုပ်ပါ။

စည်းကမ်း ၃-သင်၏ထုတ်ယူခြင်းရည်ရွယ်ချက်ကို ရှင်းလင်းပါ။

မှတ်ချက် 7-မည်သည့် lysate စနစ်သည် နမူနာ၏ အများဆုံး စတင်သည့် ပမာဏသို့ ချဉ်းကပ်သောအခါ၊ ထုတ်ယူမှု အောင်မြင်မှုနှုန်းသည် သိသိသာသာ ကျဆင်းသွားသည်။

မှတ်ချက် 8-အောင်မြင်သော RNA ထုတ်ယူမှုအတွက် တစ်ခုတည်းသော စီးပွားရေးစံနှုန်းမှာ အထွက်နှုန်းမဟုတ်ဘဲ နောက်ဆက်တွဲစမ်းသပ်မှုများတွင် အောင်မြင်မှုဖြစ်သည်။

RNase ညစ်ညမ်းခြင်း၏ ထိပ်တန်းအရင်းအမြစ် ၁၀ ခု

1. လက်ချောင်းများသည် exogenous အင်ဇိုင်းများ၏ ပထမဆုံးရင်းမြစ်ဖြစ်သောကြောင့် လက်အိတ်များကို မကြာခဏ ဝတ်ဆင်ပြီး အစားထိုးရပါမည်။ထို့အပြင် အသက်ရှုခြင်းသည် အင်ဇိုင်းများ ၏ အရေးကြီးသော အရင်းအမြစ် ဖြစ်သောကြောင့် နှာခေါင်းစည်းများ လည်း ဝတ်ဆင်ရမည်ဖြစ်ပါသည်။လက်အိတ်မျက်နှာဖုံးဝတ်ဆင်ခြင်း၏ နောက်ထပ်အကျိုးကျေးဇူးတစ်ခုမှာ စမ်းသပ်သူအား ကာကွယ်ရန်ဖြစ်သည်။

2. Pipette အကြံပြုချက်များ၊ centrifuge ပြွန်များ၊ pipettes – RNase ကို ပိုးသတ်ခြင်းတစ်ခုတည်းဖြင့် အသက်မသွင်းနိုင်ပါ၊ ထို့ကြောင့် pipette tips နှင့် centrifuge tubes များကို DEPC နှင့် ကုသသည်ဟု အမှတ်အသားပြုထားသည့်တိုင် DEPC ဖြင့် ကုသသင့်ပါသည်။အထူးသဖြင့် တုတ်တံကို အသုံးမပြုမီ 75% အယ်လ်ကိုဟော ဂွမ်းလုံးဖြင့် သုတ်ရန် အထူးရည်ရွယ်ချက်သုံးပိုက်ကို အသုံးပြုရန် အကောင်းဆုံးဖြစ်သည်။ထို့အပြင် head remover မသုံးရန်သေချာပါစေ။

3. ရေ/ကြားခံသည် RNase ညစ်ညမ်းမှု ကင်းရမည်။

4. အနည်းဆုံး စစ်ဆေးမှုစားပွဲအား 75% အရက်ဂွမ်းလုံးများဖြင့် သုတ်သင့်သည်။

5.Endogenous RNase တစ်ရှူးအားလုံးတွင် endogenous အင်ဇိုင်းများပါ၀င်သောကြောင့် တစ်ရှူးများကို နိုက်ထရိုဂျင်အရည်ဖြင့် အမြန်အေးခဲခြင်းသည် ပျက်စီးယိုယွင်းမှုကို လျှော့ချရန် အကောင်းဆုံးနည်းလမ်းဖြစ်သည်။နိုက်ထရိုဂျင်အရည် သိုလှောင်ခြင်း/ကြိတ်ခြင်းနည်းလမ်းသည် အဆင်မပြေသော်လည်း ၎င်းသည် endogenous အင်ဇိုင်းများ မြင့်မားသော တစ်ရှူးများအတွက် တစ်ခုတည်းသောနည်းလမ်းဖြစ်သည်။

6. RNA နမူနာများ RNA ထုတ်ယူသည့် ထုတ်ကုန်များတွင် RNase ညစ်ညမ်းမှုခြေရာများ ပါဝင်နိုင်သည်။

7. Plasmid ထုတ်ယူခြင်း Plasmid ထုတ်ယူခြင်းသည် RNA ကို ပြိုကွဲစေရန် Rnase ကို အသုံးပြုပြီး ကျန်ရှိသော Rnase ကို Proteinase K ဖြင့် ချေဖျက်ပြီး PCI မှ ထုတ်ယူသင့်ပါသည်။

8. RNA သိုလှောင်မှုကို အပူချိန်နိမ့်သောနေရာတွင် သိမ်းဆည်းထားသော်လည်း၊ RNase ၏ခြေရာခံ ပမာဏသည် RNA ပျက်စီးခြင်းကို ဖြစ်စေသည်။RNA ၏ရေရှည်ထိန်းသိမ်းမှုအတွက် အကောင်းဆုံးဖြေရှင်းချက်မှာ အယ်လ်ကိုဟောသည် အပူချိန်နိမ့်သောအချိန်တွင် အင်ဇိုင်းလုပ်ဆောင်မှုအားလုံးကို ဟန့်တားသောကြောင့် ဆား/အရက်ဆိုင်းဆိုင်းမှုဖြစ်သည်။

9. cations (Ca, Mg) တွင် အဆိုပါ အိုင်းယွန်းများ ပါ၀င်ပါက 80C တွင် 5 မိနစ်ကြာ အပူပေးခြင်းဖြင့် RNA ကို ခွာထုတ်နိုင်စေသည်၊ ထို့ကြောင့် RNA ကို အပူပေးရန်လိုအပ်ပါက၊ ထိန်းသိမ်းသည့်အဖြေတွင် chelating agent (1mM Sodium Citrate, pH 6.4) ပါဝင်ရန်လိုအပ်ပါသည်။

10. နောက်ဆက်တွဲ စမ်းသပ်မှုများတွင် အသုံးပြုသော အင်ဇိုင်းများသည် RNase မှ ညစ်ညမ်းသွားနိုင်သည်။

RNA ထုတ်ယူခြင်းအတွက် အကြံပြုချက် ၁၀

1- RNase လုပ်ဆောင်ချက်ကို အမြန်တားဆီးပါ။နမူနာများကို စုဆောင်းပြီးနောက် လျင်မြန်စွာ အေးခဲသွားပြီး၊ RNase သည် lysis အတွင်း လျင်မြန်စွာ လည်ပတ်ခြင်းဖြင့် အသက်မဝင်ပါ။

2- မြင့်မားသော ribozyme ပါဝင်မှုရှိသော တစ်ရှူးများအတွက် သင့်လျော်သော ထုတ်ယူနည်းကို ရွေးချယ်ပါ၊ နှင့် adipose တစ်ရှူးသည် ဖီနောပါရှိသော နည်းလမ်းကို အသုံးပြုရန် အကောင်းဆုံးဖြစ်သည်။

3- ခန့်မှန်းမှုအရည်အသွေးသည် မြောက်ပိုင်းလိုအပ်သည်၊ cDNA စာကြည့်တိုက်တည်ဆောက်မှုတွင် မြင့်မားသောသမာဓိလိုအပ်ပြီး RT-PCR နှင့် RPA (Ribonuclease protection assay) သည် မြင့်မားသောသမာဓိမလိုအပ်ပါ။RT-PCR သည် မြင့်မားသောသန့်စင်မှု (အင်ဇိုင်းအင်ဇိုင်းအကြွင်းအကျန်များ) လိုအပ်သည်။

4- စေ့စပ်သေချာစွာ တစ်သားတည်းဖြစ်စေခြင်းသည် အထွက်နှုန်းကို မြှင့်တင်ရန်နှင့် ပျက်စီးယိုယွင်းမှုကို လျှော့ချရန် သော့ချက်ဖြစ်သည်။

5- RNA electrophoresis detection ၏ ခိုင်မာမှုကို စစ်ဆေးပါ၊ 28S: 18S = 2:1 သည် ပြီးပြည့်စုံသော လက္ခဏာဖြစ်ပြီး၊ 1:1 သည် စမ်းသပ်မှုအများစုအတွက်လည်း လက်ခံနိုင်သည်။

6- RT-PCR အတွက် DNA ဖယ်ရှားခြင်း ၊ array analysis အတွက် DNA ကိုဖယ်ရှားရန် Dnase I ကိုအသုံးပြုခြင်းသည် အကောင်းဆုံးဖြစ်သည်။

7- exogenous အင်ဇိုင်းများ ညစ်ညမ်းမှုကို လျှော့ချပါ – ​​အင်ဇိုင်းများကို ပြင်ပမှ မတင်သွင်းနိုင်ပါ။

8- အာရုံစူးစိုက်မှုနည်းသော နျူကလိစ်အက်ဆစ်ကို အာရုံစူးစိုက်သောအခါ၊ တွဲဖက်မိုးရွာစေသော ဓာတ်ပစ္စည်းများကို ထည့်သင့်သည်။သို့သော် အင်ဇိုင်းများနှင့် DNA ပါဝင်သော ညစ်ညမ်းမှုကို တားဆီးရန်။

9- လိုအပ်ပါက RNA ကို 65C တွင် 5 မိနစ်ခန့် အပူပေးပါ။

သင့်လျော်သောသိုလှောင်မှုနည်းလမ်း

-20C တွင် အချိန်တိုအတွင်း သိမ်းဆည်းနိုင်ပြီး -80C တွင် အချိန်ကြာမြင့်စွာ သိမ်းဆည်းနိုင်ပါသည်။RNA အထွက်နှုန်းကို မြှင့်တင်ရာတွင် ပထမအဆင့်မှာ မတူညီသောနမူနာများ၏ RNA ပါဝင်မှု အလွန်ကွာခြားကြောင်း နားလည်ရန်ဖြစ်သည်။အသည်း၊ ပန်ကရိယ၊ နှလုံး၊ ဦးနှောက်၊ သန္ဓေသား၊ ကျောက်ကပ်၊ အဆုတ်၊ စမုန်ဖြူ၊ သားဥအိမ်၊ ဆီးအိမ်၊ အရိုး၊ အဆီကဲ့သို့သော ကြွယ်ဝမှု (<0.05ug/mg) မီလီဂရမ်၊ အလတ်စားကြွယ်ဝမှု (0.05-2ug/mg) စသည်တို့ဖြစ်သည်။

1- RN ကို ထုတ်လွှတ်ရန် Lyse ဆဲလ်များ – RNA မထုတ်ပါက အထွက်နှုန်း လျော့ကျသွားမည်ဖြစ်သည်။အီလက်ထရွန်းနစ် ပေါင်းစပ်ဖွဲ့စည်းခြင်းသည် အခြားသော ရောနှောခြင်းနည်းလမ်းများထက် ပိုမိုကောင်းမွန်သော်လည်း၊ နိုက်ထရိုဂျင်အရည်ကို ကြိတ်ချေခြင်း၊ အင်ဇိုင်းအစာခြေခြင်း (Lysozyme/Lyticase) ကဲ့သို့သော အခြားနည်းလမ်းများနှင့် ပေါင်းစပ်ရန် လိုအပ်ပါသည်။

2- ထုတ်ယူမှုနည်းလမ်းကို ပိုမိုကောင်းမွန်အောင်ပြုလုပ်ခြင်း။ဖီနောအခြေခံနည်းလမ်းများနှင့် အကြီးမားဆုံးပြဿနာများမှာ ပြီးပြည့်စုံသော stratification နှင့် တစ်စိတ်တစ်ပိုင်း RNA ဆုံးရှုံးမှု (supernatant ကို လုံးဝဖယ်ရှား၍မရပါ)။မပြည့်စုံသော stratification သည် အသုံးပြုထားသော lysate ပမာဏကို တိုးမြှင့်ခြင်း သို့မဟုတ် နမူနာပမာဏကို လျှော့ချခြင်းဖြင့် ဖြေရှင်းနိုင်သော နူကလိစ်အက်ဆစ်နှင့် ပရိုတင်းပါဝင်မှု မြင့်မားခြင်းကြောင့်ဖြစ်သည်။ကလိုရိုဖောင် ထုတ်ယူခြင်း၏ အဆင့်တစ်ဆင့်ကို adipose တစ်ရှူးသို့ ထည့်သွင်းခဲ့သည်။RNA ဆုံးရှုံးမှုကို back-pumping ဖြင့် သို့မဟုတ် centrifugation လုပ်ပြီးနောက် အော်ဂဲနစ်အလွှာကို ဖယ်ရှားခြင်းဖြင့် လျှော့ချနိုင်သည်။ကော်လံ centrifugation-based method ၏အကြီးမားဆုံးပြဿနာမှာ ပိုလျှံနမူနာဖြစ်သည်။

ဂန္ထဝင် ထုတ်ယူခြင်းဆိုင်ရာ အကြံပြုချက်များ

1. Phenol သန့်စင်ခြင်း- 1:1 Phenol/Chloroform ညီမျှသော ပမာဏကို ထည့်ပြီး 1-2 မိနစ်ခန့် ပြင်းပြင်းထန်ထန် ရောမွှေပါ။အရှိန်ပြင်းပြင်းဖြင့် 2 မိနစ် centrifuge ။supernatant (80-90%) ကို ဂရုတစိုက်ဖယ်ရှားပါ။အလယ်အလွှာကို ဘယ်တော့မှ မရောက်ဘူး။Phenol/Chloroform တွင် တုံ့ပြန်မှုအဖြေ၏ တူညီသောပမာဏကို ပေါင်းထည့်နိုင်ပြီး supernatant ကို ဖယ်ရှားနိုင်သည်။အထွက်နှုန်းတိုးတက်စေရန် nucleic acid မိုးရွာသွန်းမှုအတွက် supernatant နှစ်ခုကို ရောစပ်နိုင်သည်။ရောစပ်သည့်အခါ အလွန်သိမ်မွေ့မနေပါနှင့်၊ လွန်ကဲသော အရာအားလုံးကို ဖယ်ရှားရန် မကြိုးစားပါနှင့်။

2. 70-80% Ethanol ဖြင့် ဆေးကြောခြင်း- လက်ဆေးစဉ်တွင် ကျန်ရှိသောဆားများကို ဆေးကြောသန့်စင်ကြောင်း သေချာစေရန်အတွက် nucleic acid ကို ဆိုင်းငံ့ထားရပါမည်။တစ်ချိန်တည်းမှာပင်၊ အီသနောကို လောင်းချပြီးပြီးချင်း၊ စက္ကန့်အနည်းငယ်ကြာ အရှိန်ပြင်းပြင်းဖြင့် အာရုံစူးစိုက်စိုက်ထုတ်ကာ ကျန်ရှိသော အီသနောကို ပိုက်ပိုက်ဖြင့် ဖယ်ရှားလိုက်ပါ။အခန်းအပူချိန်မှာ 5-10 မိနစ်လောက်ထားပြီးမှ အရည်ပျော်ပါ။

11. အထူးအဖွဲ့အစည်းများအား ထုတ်ယူခြင်း။

1. Fibrous တစ်ရှူး- နှလုံး/အရိုးစု ကြွက်သားကဲ့သို့သော အမျှင်တစ်ရှူးများမှ RNA ထုတ်ယူခြင်းအတွက် အဓိကသော့ချက်မှာ တစ်ရှူးများကို လုံးဝ အနှောင့်အယှက်ဖြစ်စေပါသည်။ဤတစ်ရှူးများသည် ဆဲလ်သိပ်သည်းဆနည်းသောကြောင့် တစ်ရှူး၏အလေးချိန်တစ်ယူနစ်လျှင် RNA ပမာဏနည်းပါးပြီး တတ်နိုင်သမျှ စတင်ပမာဏကို အသုံးပြုခြင်းသည် အကောင်းဆုံးဖြစ်သည်။အေးခဲနေသောအခြေအနေအောက်တွင် တစ်သျှူးကို သေချာစွာကြိတ်ပါ။

2. ပရိုတင်း/အဆီပါဝင်မှု မြင့်မားသော တစ်ရှူးများ- ဦးနှောက်/ဟင်းသီးဟင်းရွက် အဆီပါဝင်မှု မြင့်မားသည်။PCI ထုတ်ယူပြီးနောက်တွင်၊ supernatant တွင် အဖြူရောင် floccules များပါရှိသည်။supernatant ကို chloroform ဖြင့် ပြန်လည် ထုတ်ယူရပါမည်။

3. နျူကလိယအက်ဆစ်/ရီဘိုဇိုင်းပါဝင်မှု မြင့်မားသော တစ်ရှူးများ- သရက်ရွက်/သိုင်းမတ်တွင် နူကလိစ်အက်ဆစ်နှင့် ရီဘိုဇိုင်းပါဝင်မှု မြင့်မားသည်။အေးခဲနေသော အခြေအနေအောက်တွင် တစ်သျှူးများကို လျင်မြန်စွာ တစ်သားတည်းဖြစ်အောင်ပြုလုပ်ခြင်းဖြင့် ကြိတ်ချေခြင်းသည် ribozymes ကို ထိထိရောက်ရောက် အစွမ်းမပြနိုင်ပါ။သို့သော်၊ lysate သည် အလွန်ပျစ်နေပါက (မြင့်မားသော nucleic acid ပါဝင်မှုကြောင့်) PCI ထုတ်ယူမှုသည် ထိထိရောက်ရောက် stratify လုပ်နိုင်မည်မဟုတ်ပါ။lysate ထပ်ထည့်ခြင်းဖြင့် ဤပြဿနာကို ဖြေရှင်းနိုင်ပါသည်။PCI အများအပြားထုတ်ယူခြင်းသည် ပိုကျန်နေသော DNA ကိုဖယ်ရှားနိုင်သည်။အယ်လ်ကိုဟောထည့်ပြီးတာနဲ့ ဖြူစင်တဲ့ မိုးရေတွေ ထွက်လာရင် DNA ညစ်ညမ်းမှုကို ညွှန်ပြပါတယ်။ဖျက်သိမ်းပြီးနောက် အက်စစ်ဓာတ် PCI ဖြင့် ပြန်လည်ထုတ်ယူခြင်းသည် DNA ညစ်ညမ်းမှုကို ဖယ်ရှားနိုင်သည်။

4. အပင်တစ်သျှူး- အပင်တစ်သျှူးသည် တိရစ္ဆာန်တစ်သျှူးများထက် ပိုမိုရှုပ်ထွေးသည်။ယေဘူယျအားဖြင့် အပင်များသည် နိုက်ထရိုဂျင်အရည်အခြေအနေအောက်တွင် မြေစိုက်ထားသောကြောင့် RNA သည် endogenous အင်ဇိုင်းများအားဖြင့် ပျက်ဆီးခြင်းမှာ ရှားပါသည်။ပျက်စီးယိုယွင်းမှုပြဿနာကို မဖြေရှင်းနိုင်ပါက၊ ၎င်းသည် နမူနာတွင်ပါရှိသော အညစ်အကြေးများကြောင့် သေချာပေါက်နီးပါးဖြစ်နိုင်သည်။အပင်များစွာတွင်ပါရှိသော အညစ်အကြေးများသည် အကြွင်းအကျန်များဆီသို့ ဦးတည်သွားစေပြီး အကြွင်းအကျန်များ၏ အကြောင်းရင်းမှာ ဤအညစ်အကြေးများသည် RNA နှင့် အချို့သော ဆင်တူမှုများကြောင့် ဖြစ်တတ်သည်- သင်မိုးရွာသည်နှင့် ကျွန်ုပ်သည် မိုးရွာကာ၊ သင်စုပ်ယူ၍ စုပ်ယူနိုင်သောကြောင့် ဖြစ်သည်။ဤလက္ခဏာများသည် ၎င်းတို့သည် အလွန်ပြင်းထန်သော အင်ဇိုင်းတားဆေးများဖြစ်ကြောင်း ဆုံးဖြတ်သည်။

လက်ရှိတွင်၊ စီးပွားဖြစ် RNA ထုတ်ယူသည့် ဓာတ်ပစ္စည်းများကို သေးငယ်သော ချိန်ညှိမှုဖြင့် တိရစ္ဆာန်တစ်သျှူးအားလုံးနီးပါးတွင် လိုက်လျောညီထွေဖြစ်အောင် ပြုလုပ်နိုင်သော်လည်း အပင်တစ်သျှူးအများစုအတွက် သင့်လျော်နိုင်သည့် စီးပွားဖြစ် RNA ထုတ်ယူသည့် ဓာတုပစ္စည်း အနည်းငယ်ရှိသည်။ကံကောင်းထောက်မစွာ၊ Foregene သည် အထူးပံ့ပိုးပေးနိုင်သည်။အပင် RNA ထုတ်ယူမှုသေတ္တာများ, ကြှနျုပျတို့မှာ ... ရှိသညျPlant Total RNA Isolation အစုံ, Plant Total RNA Isolation Kit Plus.နောက်ပိုင်းတွင် polysaccharide နှင့် polyphenol ပါဝင်မှုမြင့်မားသောအပင်များအတွက်အထူးဒီဇိုင်းပြုလုပ်ထားသည်။RNA ထုတ်ယူမှုအတွက်၊ ဓာတ်ခွဲခန်းအသုံးပြုသူများထံမှ အကြံပြုချက်သည် အထူးကောင်းမွန်ပါသည်။

12. နမူနာအေးခဲခြင်းနှင့် ရောခြင်း၏အကျိုးသက်ရောက်မှု အေးခဲထားသောနမူနာသည် ပိုမိုကြီးမားနိုင်ပြီး RNA ထုတ်ယူခြင်းအတွက် အသုံးမပြုမီ ဖြတ်တောက်ရန် လိုအပ်သည်။နမူနာများသည် ဖြတ်တောက်စဉ် (တစ်စိတ်တစ်ပိုင်း ဖြစ်နိုင်သည်) အရည်ပျော်သွားတတ်သည်။အေးခဲထားသောနမူနာများကို RNA ထုတ်ယူခြင်းမပြုမီ ချိန်တွယ်ရန် လိုအပ်ပြီး ဤလုပ်ငန်းစဉ်အတွင်း ဖြူရော်လာမည်မှာ သေချာပါသည်။တခါတရံတွင်၊ နိုက်ထရိုဂျင်အရည်ကြိတ်ခြင်း လုပ်ငန်းစဉ်အတွင်း နမူနာ၏ ရောနှောခြင်းသည်လည်း ဖြစ်ပေါ်သည်။သို့မဟုတ် အေးခဲထားသောနမူနာကို နိုက်ထရိုဂျင်အရည်ကြိတ်ခြင်းမရှိဘဲ lysate ထဲသို့ တိုက်ရိုက်ထည့်သည်၊ ပြီးပြည့်စုံသော ရောနှောခြင်းမပြုမီ ကျိန်းသေပေါက်လိမ့်မည်။အေးခဲသောတစ်ရှူးများသည် လတ်ဆတ်သောတစ်ရှူးများထက် သုတ်နေစဉ်အတွင်း RNA ပြိုကွဲနိုင်ခြေပိုများကြောင်း စမ်းသပ်မှုများက ပြသခဲ့သည်။ဖြစ်နိုင်ခြေ အကြောင်းရင်း- အေးခဲသော သုတ်ခြင်း ဖြစ်စဉ်သည် ဆဲလ်အတွင်းရှိ အဆောက်အဦများကို နှောင့်ယှက်စေပြီး၊ endogenous အင်ဇိုင်းများသည် RNA နှင့် တိုက်ရိုက်ထိတွေ့ရန် ပိုမိုလွယ်ကူစေသည်။

13. RNA အရည်အသွေးကို စီရင်ခြင်း ပုံမှန်အားဖြင့် RNA ၏ ခိုင်မာမှုကို စစ်ဆေးရန် electrophoresis ကို အသုံးပြုပြီး A260/A280 ကို RNA ၏ သန့်စင်မှုကို စီရင်ရန်အတွက် အသုံးပြုပါသည်။သီအိုရီအရ၊ နဂိုအတိုင်း RNA အချိုးသည် 28S:18S = 2.7:1 ရှိပြီး အချက်အလက်အများစုသည် 28S:18S = 2:1 အချိုးကို အလေးပေးသည်။အမှန်မှာ ဆဲလ်များမှလွဲ၍ အခြားနမူနာများမှ ထုတ်ယူသော RNA သည် 2:1 အချိုးတွင် မရှိသည် (၎င်းကို Agilent Bioanalyzer အသုံးပြု၍ ရရှိခဲ့သည်)။

RNA ၏ electrophoresis ရလဒ်များသည် အလယ်တန်းဖွဲ့စည်းပုံ၊ electrophoresis အခြေအနေများ၊ နမူနာဝန်၊ EB ၏ saturation ဒီဂရီ၊ စသည်တို့အပါအဝင် အကြောင်းရင်းများစွာကြောင့် ထိခိုက်ပါသည်။ RNA ကိုသိရှိရန် ဇာတိ electrophoresis ကိုသုံး၍ ထိန်းချုပ်မှုအဖြစ် DNA Marker ကိုအသုံးပြုပါ။2kb တွင် 28S နှင့် 0.9kb တွင် 18S တို့သည် ရှင်းလင်းပြီး 28S: 18S > 1 ဖြစ်ပါက၊ သမာဓိသည် နောက်ဆက်တွဲစမ်းသပ်မှုအများစု၏ လိုအပ်ချက်များကို ဖြည့်ဆည်းပေးနိုင်သည်။

A260/A280 သည် များစွာရှုပ်ထွေးမှုကို ဖြစ်စေသည့် ညွှန်ကိန်းတစ်ခုဖြစ်သည်။ပထမဦးစွာ၊ nucleic acids အတွက် ဤညွှန်ကိန်း၏ မူရင်းအဓိပ္ပါယ်ကို ရှင်းလင်းရန် လိုအပ်သည်- သန့်စင်သော RNA၊ ၎င်း၏ A260/280 = 2.0 ခန့်။Pure RNA သည် 'အကြောင်းတရား' ဖြစ်ပြီး A260/A280 = 2 သည် 'အကျိုးသက်ရောက်မှု' ဖြစ်သည်။ယခုအခါ လူတိုင်းသည် A260/A280 ကို 'အကြောင်းရင်း' အဖြစ် အသုံးပြုနေကြပြီး "A260/A280 = 2 ဖြစ်ပါက RNA သည် သန့်ရှင်းသည်" ဟု သဘာဝအားဖြင့် ရှုပ်ထွေးမှုများ ဖြစ်စေသည်။

စိတ်ပါဝင်စားပါက၊ phenol၊ guanidine isothiocyanate၊ PEG စသည်တို့ကို ထုတ်ယူရာတွင် အသုံးပြုလေ့ရှိသည့် ဓာတ်ပစ္စည်းအနည်းငယ်ကို သင်၏ RNA နမူနာတွင် ထည့်သွင်းနိုင်ပြီး A260/A280 အချိုးကို တိုင်းတာနိုင်ပါသည်။အဖြစ်မှန်မှာ RNA ထုတ်ယူမှုအတွက် အသုံးပြုသည့် ဓာတ်ပစ္စည်းများအများအပြားအပြင် နမူနာရှိ အညစ်အကြေးအများအပြားသည် A260 နှင့် A280 ဝန်းကျင်ကို စုပ်ယူနိုင်ပြီး A260/A280 ကို ထိခိုက်စေပါသည်။

လက်ရှိတွင် သင်ယူစရာအကောင်းဆုံးနည်းလမ်းမှာ 200-300 nm အကွာအဝေးရှိ RNA နမူနာများကို စကင်န်ဖတ်ရန်ဖြစ်သည်။သန့်စင်သော RNA မျဉ်းကွေးတွင် အောက်ပါလက္ခဏာများ ရှိသည်- မျဉ်းကွေးသည် ချောမွေ့သည်၊ A230 နှင့် A260 သည် ဖောက်ပြန်သည့်အမှတ်နှစ်ခုဖြစ်သည်၊ A300 သည် 0 နှင့် နီးစပ်သည်၊ A260/A280 = 2.0 ဝန်းကျင်၊ နှင့် A260/A230 = 2.0 ဝန်းကျင်။စကင်န်ဒေတာကို မရရှိနိုင်ပါက၊ ဤအချိုးသည် အင်ဇိုင်းတုံ့ပြန်မှုအပေါ်သက်ရောက်သည့် အညစ်အကြေးများအားလုံးကို သယ်ဆောင်ခြင်းအပေါ် ပိုမိုထိခိုက်နိုင်သောကြောင့် A260/A230 အချိုးကိုလည်း ဆုံးဖြတ်ရပါမည်။စက်၏ မျဉ်းကြောင်းအကွာအဝေး (A260 အတွက် 0.1-0.5) ကို ထည့်သွင်းစဉ်းစားပါ။

အခြားအသုံးဝင်သောဖြစ်စဉ်နှစ်ခုရှိပါသည်- A260/A280 ကို ရေတွင်တိုင်းတာသောအခါ အချိုးသည် 0.3 ခန့် နိမ့်ပါမည်။10 mM EDTA တွင်တိုင်းတာသည့်အချိုးသည် 1 mM EDTA တွင်တိုင်းတာသည့်ထက် 0.2 ခန့်ပိုမိုမြင့်မားသည်။

ဆက်စပ်ထုတ်ကုန်များ-

တရုတ်စက်ရုံ စုစုပေါင်း RNA သီးခြားခွဲထုတ်ကိရိယာ ထုတ်လုပ်သူနှင့် ပေးသွင်းသူ |Foregene (foreivd.com)

RNA အထီးကျန်စီးရီး ပေးသွင်းသူများနှင့် စက်ရုံ |တရုတ် RNA အထီးကျန်စီးရီး ထုတ်လုပ်သူများ (foreivd.com)

RNA အထီးကျန်စီးရီး - Foregene Co., Ltd. (foreivd.com)