(96-ကောင်းစွာ) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR Kit – SYBR Green I
ဖော်ပြချက်
ဟိ(၉၆-ကောင်းစွာ) QuickEasyTM ဆဲလ်တိုက်ရိုက် RT-qPCR Kit–SYBR Green Iထောက်ပံ့ထူးခြားသော lysis ကြားခံစနစ်to RNA ကို အမြန်ထုတ်ပါ။ယဉ်ကျေးမှုဆဲလ်များမှRT-qPCR တုံ့ပြန်မှုများအတွက်နမူနာများ၊ အချိန်ကုန်ပြီးပင်ပန်းခက်ခဲမှုများကိုဖယ်ရှားပေးသည်။RNA သန့်စင်ခြင်းလုပ်ငန်းစဉ်သည် လိုအပ်သော RNA ပုံစံကိုရရှိရန် 7 မိနစ်သာကြာပါသည်။ဟိ5× တိုက်ရိုက် RT ရောနှောခြင်း။နှင့်2× တိုက်ရိုက် qPCR ရောနှော-SYBRbox ထဲမှာ ပေးထားပြီး မြန်မြန်ဆန်ဆန်နဲ့ လုပ်နိုင်ပါတယ်။အချိန်နှင့်တပြေးညီ ပမာဏကို ထိထိရောက်ရောက် ရယူပါ။PCR ရလဒ်များ။
5× Direct RT Mix နှင့် 2× Direct qPCR Mix-SYBR သည် ပြင်းထန်သော တားဆေးသည်းခံနိုင်စွမ်းရှိပြီး ထိရောက်သော ပြောင်းပြန်စာသားနှင့် တိကျသောချဲ့ထွင်မှုများအတွက် နမူနာပုံစံတစ်ခုအဖြစ် စမ်းသပ်ရန် နမူနာ၏ lysate ကို အသုံးပြုနိုင်သည်။ဓါတ်ကူပစ္စည်းတွင် RNA အတွက် မြင့်မားသော ဆက်စပ်မှုရှိသော Foregene ထူးခြားသော Reverse Transcriptase နှင့် Hot D-Taq DNA Polymerase ၊ dNTPs ၊ MgCl တို့ပါရှိသည်။2 ၊ တုံ့ပြန်မှုကြားခံ၊ PCR optimizer နှင့် stabilizer နှင့် နမူနာအား လျင်မြန်စွာ၊ လွယ်ကူစွာနှင့် တိကျစွာသိရှိနိုင်စေရန်အတွက် lysis buffer နှင့် တွဲဖက်အသုံးပြုနိုင်ပြီး ၎င်းတွင် မြင့်မားသော sensitivity၊ ပြင်းထန်သောတိကျမှုနှင့် ကောင်းမွန်သောတည်ငြိမ်မှုတို့၏ဝိသေသလက္ခဏာများရှိသည်။
အစုံလိုက်သည် 96-ကောင်းစွာ မွေးမြူထားသောဆဲလ်များ၏ မိုက်ခရိုစနစ် lysis ကို ရည်ရွယ်ပြီး ကောင်းမွန်သော တူညီမှုနှင့် ညီညွတ်မှုရှိသည်။အစုံလိုက်အစိတ်အပိုင်းများသည် 96 lysis တုံ့ပြန်မှုများ၊ 96 reverse transcription တုံ့ပြန်မှုများနှင့် 96×2 qPCR တုံ့ပြန်မှုများ ပေးစွမ်းနိုင်ပြီး၊ တစ်ကြိမ်အသုံးပြုရန်အတွက် 96- well cell plate နှင့် ကိုက်ညီသည့် တုံ့ပြန်မှုများ၊ ထပ်ခါတလဲလဲဖွင့်ခြင်း၊ အေးခဲခြင်းနှင့် ဖျော်ရည်များ အရည်ပျော်ခြင်းနှင့် ဓာတ်ပစ္စည်းများ၏စွမ်းဆောင်ရည်ကျဆင်းခြင်းတို့ကြောင့်ဖြစ်ရသည့် ညစ်ညမ်းမှုကို ရှောင်ရှားနိုင်သည်။
Kit အစိတ်အပိုင်းများ
| Kit ဖွဲ့စည်းမှု ( 50 μL lysis စနစ်/၂0 μLRT တုံ့ပြန်မှုစနစ် /20μL qPCR တုံ့ပြန်မှုစနစ်) | DRT-03၀၁၁ | မှတ်ချက် | |
| 96T | |||
| အပိုင်းI | ကြားခံCL | 5 mL | ဆဲလ်Lysis |
| ForegeneProtease Plus II | ၁၀၀ μL | ||
| ကြားခံST | ၅၀၀ μL | ||
| အပိုင်း II | DNAခဲဖျက် | ၁၀၀ μL | |
| 5× တိုက်ရိုက် RT ရောနှောခြင်း။ | ၄၀၀ μL | RT | |
| 2× တိုက်ရိုက် qPCR ရောနှောခြင်း။-SYBR | ၁ မီတာL × ၂ | qPCR | |
| 50× ROX ရည်ညွှန်းဆိုးဆေး | 400µL | ||
| RNase- အခမဲ့ddH2 O | 1.7 မီလီမီတာ |
| |
| Mနှစ်ပတ်လည် | 1 အပိုင်းအစ | 1 ထမ်းဆောင်ခြင်း။ | |
*: lysis reagent DNA Eraser ကို အစုံလိုက်၏ အပိုင်း II တွင် ပါဝင်သည်။Cell Lysis၊ RT နှင့် qPCR အစိတ်အပိုင်းများကို သီးခြားစီ ဝယ်ယူနိုင်ပါသည်။
အင်္ဂါရပ်များနှင့် အားသာချက်များ
■ရိုးရှင်းပြီး ထိရောက်မှု - Cell Direct RT နည်းပညာဖြင့် RNA နမူနာများကို 7 မိနစ်အတွင်း ရရှိနိုင်သည်။
■ နမူနာလိုအပ်ချက်သည် သေးငယ်သည်၊ ဆဲလ် ၁၀ ခုအထိ စမ်းသပ်နိုင်သည် ။
■ မြင့်မားသောထွက်ရှိမှု- ၎င်းသည် 384၊ 96၊ 24၊ 12၊ 6- well plates များတွင် မွေးမြူထားသောဆဲလ်များတွင် RNA ကို လျင်မြန်စွာသိရှိနိုင်သည်။
■ DNA Eraser သည် ထွက်ရှိလာသော ဂျီနိုမ်များကို လျင်မြန်စွာ ဖယ်ရှားနိုင်ပြီး၊ နောက်ဆက်တွဲ စမ်းသပ်မှုရလဒ်များအပေါ် သက်ရောက်မှုကို များစွာလျှော့ချနိုင်သည်။
■ Optimized RT နှင့် qPCR စနစ်သည် အဆင့်နှစ်ဆင့် RT-PCR ပြောင်းပြန်စာသားကို ပိုမိုထိရောက်စေပြီး PCR သည် ပိုမိုတိကျပြီး RT-qPCR တုံ့ပြန်မှုတားဆီးပေးသူများကို ပိုမိုခံနိုင်ရည်ရှိစေသည်။
Kit လျှောက်လွှာ
အသုံးချမှုနယ်ပယ်- မွေးမြူထားသောဆဲလ်များ။
- နမူနာ lysis မှထုတ်လွှတ်သော RNA- ဤကိရိယာ၏ RT-qPCR နမူနာပုံစံအတွက်သာ သက်ဆိုင်ပါသည်။
- အစုံအလင်ကို အောက်ပါရည်ရွယ်ချက်များအတွက်အသုံးပြုနိုင်သည်- မျိုးရိုးဗီဇဖော်ပြမှုခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှု၊ siRNA-mediated gene silencing effect၊ ဆေးစစ်ခြင်းစသည်ဖြင့်။
သိုလှောင်မှုနှင့် စင်သက်တမ်း
ဤကိရိယာ၏ အပိုင်း ၁ ကို ၄ တွင် သိမ်းဆည်းထားသင့်သည်။℃;အပိုင်း II ကို -20 ℃ တွင်သိမ်းဆည်းထားသင့်သည်။
Foregene Protease Plus II ကို 4 တွင်သိမ်းဆည်းသင့်သည်။℃၊ -20 ℃ တွင် အေးခဲမနေပါနှင့်။
ဓါတ်ဆေး ၂×တိုက်ရိုက် qPCR Mix-Taqman ကို -20 တွင်သိမ်းဆည်းထားသင့်သည်။℃အမှောင်ထဲမှာ;မကြာခဏအသုံးပြုပါက 4 တွင်သိမ်းဆည်းနိုင်သည်။ရေတို သိုလှောင်မှု အတွက် ℃ (10 ရက်အတွင်း အသုံးပြုရန်)။
Real Time PCR primer ဒီဇိုင်းအခြေခံမူ
ရှေ့သို့ Primer နှင့် Reverse Primer
Real Time PCR အတွက်၊ primer ဒီဇိုင်းသည် အလွန်အရေးကြီးပါသည်။Primers များသည် PCR amplification ၏ တိကျမှုနှင့် ထိရောက်မှုတို့နှင့် ဆက်စပ်နေပြီး အောက်ပါအခြေခံမူများကို ကိုးကား၍ ဒီဇိုင်းထုတ်နိုင်သည်။
- Primer အရှည်- 18-30bp။
- GC ပါဝင်မှု- 40-60%။
- Tm တန်ဖိုး- Primer 5 ကဲ့သို့သော Primer ဒီဇိုင်းဆော့ဖ်ဝဲသည် primer ၏ Tm တန်ဖိုးကို ပေးနိုင်သည်။အထက်ပိုင်းနှင့် အောက်ပိုင်း primers များ၏ Tm တန်ဖိုးများသည် တတ်နိုင်သမျှ နီးစပ်သင့်သည်။Tm တွက်ချက်မှုဖော်မြူလာကိုလည်း သုံးနိုင်သည်- Tm = 4°C (G + C) + 2°C (A + T)။PCR ကိုလုပ်ဆောင်သောအခါ၊ primer Tm တန်ဖိုး 5°C အောက်ရှိ အပူချိန်ကို annealing temperature အဖြစ် ယေဘူယျအားဖြင့် ရွေးချယ်သည် (သက်ဆိုင်ရာ အပူချိန်တိုးလာခြင်းသည် PCR တုံ့ပြန်မှု၏ တိကျမှုကို တိုးလာစေသည်)။
- Primers နှင့် PCR ထုတ်ကုန်များ
- ဒီဇိုင်း primer PCR amplification ထုတ်ကုန်အရှည်သည် 100-150bp ပိုကောင်းသည်။
- ပုံစံပလိတ်၏ အလယ်တန်းဖွဲ့စည်းပုံဆိုင်ရာ ဧရိယာရှိ ဒီဇိုင်း primer များကို တတ်နိုင်သမျှ ရှောင်ရှားသင့်သည်။
- အထက်ပိုင်းနှင့် မြစ်အောက်ပိုင်းရှိ ပလာစတာများ၏ 3′ စွန်းများကြားတွင် ဖြည့်စွက်အခြေ 2 ခု သို့မဟုတ် ထို့ထက်ပိုသော အခြေများဖွဲ့စည်းခြင်းကို ရှောင်ကြဉ်ပါ။
- Primer 3′ terminal base သည် နောက်ထပ် 3 ဆက်တိုက် G သို့မဟုတ် C ဖြင့် မတည်ရှိနိုင်ပါ။
- Primers များတွင် ၎င်းတို့ကိုယ်တိုင် ဖြည့်စွက်ဖွဲ့စည်းပုံများ မပါဝင်နိုင်ပါ၊ သို့မဟုတ်ပါက ဆံပင်ညှပ်ဖွဲ့စည်းပုံသည် PCR ချဲ့ထွင်မှုကို ထိခိုက်စေပါသည်။
- ATCG ကို primer sequence တွင်တတ်နိုင်သမျှအညီအမျှဖြန့်ဝေသင့်ပြီး 3′ terminal base ကို T အဖြစ်ရှောင်ရှားသင့်သည်။
နောက်ဆက်တွဲ1:Cတိုက်ရိုက်RT-qPCR Kit component ဖြည့်စွက်စာ
1.Cell Lysis ဖြေရှင်းချက်
| Cell Lysis ဖြေရှင်းချက် | |||
| Kit အစိတ်အပိုင်းများ (24-well lysis system/ well)၊ | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| အပိုင်းငါ | ကြားခံ CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| ကြားခံ ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| အပိုင်းII | DNA Eraser | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT ရောသမမွှေပါ။ | |
| Kit အစိတ်အပိုင်းများ (20 μl တုံ့ပြန်မှုစနစ်) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× တိုက်ရိုက် RT ရောနှောခြင်း။ | 800 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1.7 ml × 2 |
| qPCR ရောနှောခြင်း။ | ||
| Kit အစိတ်အပိုင်းများ (20 μl တုံ့ပြန်မှုစနစ်) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× တိုက်ရိုက် qPCR ရောနှော-Taqman | 1 ml × 2 | 1.7 ml × 6 |
| 20× ROX ရည်ညွှန်းဆိုးဆေး | 40 μl | 200 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1.7 ml | 10 ml |
ညွှန်ကြားချက်လက်စွဲများ-
