Cell Direct RT qPCR Kit—SYBR GREEN I Direct Cell Lysis Cell အဆင်သင့်ဖြစ်ပြီ qRT-PCR Kits
ဖော်ပြချက်
ဤကိရိယာသည် RT-qPCR တုံ့ပြန်မှုများအတွက် ယဉ်ကျေးမှုဆိုင်ရာဆဲလ်နမူနာများမှ RNA ကို လျင်မြန်စွာထုတ်လွှတ်ပေးနိုင်သည့် ထူးခြားသော lysis ကြားခံစနစ်ကို အသုံးပြုထားပြီး၊ ထို့ကြောင့် အချိန်ကုန်ပြီး ပင်ပန်းခက်ခဲသော RNA သန့်စင်မှုလုပ်ငန်းစဉ်ကို ဖယ်ရှားပေးပါသည်။RNA နမူနာပုံစံကို 7 မိနစ်အတွင်း ရရှိနိုင်သည်။၅×Direct RT Mix နှင့် 2×အစုံလိုက်မှ ပံ့ပိုးပေးသော တိုက်ရိုက် qPCR Mix-SYBR ဓာတ်ပစ္စည်းများသည် အချိန်နှင့်တပြေးညီ အရေအတွက် PCR ရလဒ်များကို လျင်မြန်ထိရောက်စွာ ရရှိနိုင်ပါသည်။
5×Direct RT Mix နှင့် 2×Direct qPCR Mix-SYBR တွင် ပြင်းထန်သော inhibitor ခံနိုင်ရည်ရှိပြီး နမူနာများ၏ lysate ကို RT-qPCR အတွက် နမူနာပုံစံအဖြစ် တိုက်ရိုက်အသုံးပြုနိုင်ပါသည်။ဤကိရိယာတွင် ထူးခြားသော RNA မြင့်မားသောဆက်စပ်မှုရှိသော Foregene reverse transcriptase နှင့် Hot D-Taq DNA polymerase၊ dNTPs၊ MgCl တို့ပါရှိသည်။2တုံ့ပြန်မှုကြားခံ၊ PCR ပိုမိုကောင်းမွန်အောင်လုပ်ဆောင်ခြင်းနှင့် တည်ငြိမ်မှု။
သတ်မှတ်ချက်များ
၂၀၀×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Kit အစိတ်အပိုင်းများ
| အပိုင်း | ကြားခံ CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| ကြားခံ ST | |
| ဒုတိယပိုင်း | DNA Eraser |
| 5× တိုက်ရိုက် RT ရောနှောခြင်း။ | |
| 2× တိုက်ရိုက် qPCR ရောနှော-SYBR | |
| 50× ROX ရည်ညွှန်းဆိုးဆေး | |
| RNase-Free ddH2O | |
| ညွှန်ကြားချက်များ | |
အင်္ဂါရပ်များနှင့် အားသာချက်များ
■ရိုးရှင်းပြီး ထိရောက်မှု - Cell Direct RT နည်းပညာဖြင့် RNA နမူနာများကို 7 မိနစ်အတွင်း ရရှိနိုင်သည်။
■ နမူနာလိုအပ်ချက်သည် သေးငယ်သည်၊ ဆဲလ် ၁၀ ခုအထိ စမ်းသပ်နိုင်သည် ။
■ မြင့်မားသောထွက်ရှိမှု- ၎င်းသည် 384၊ 96၊ 24၊ 12၊ 6- well plates များတွင် မွေးမြူထားသောဆဲလ်များတွင် RNA ကို လျင်မြန်စွာသိရှိနိုင်သည်။
■ DNA Eraser သည် ထွက်ရှိလာသော ဂျီနိုမ်များကို လျင်မြန်စွာ ဖယ်ရှားနိုင်ပြီး၊ နောက်ဆက်တွဲ စမ်းသပ်မှုရလဒ်များအပေါ် သက်ရောက်မှုကို များစွာလျှော့ချနိုင်သည်။
■ Optimized RT နှင့် qPCR စနစ်သည် အဆင့်နှစ်ဆင့် RT-PCR ပြောင်းပြန်စာသားကို ပိုမိုထိရောက်စေပြီး PCR သည် ပိုမိုတိကျပြီး RT-qPCR တုံ့ပြန်မှုတားဆီးပေးသူများကို ပိုမိုခံနိုင်ရည်ရှိစေသည်။
Kit လျှောက်လွှာ
အသုံးချမှုနယ်ပယ်- မွေးမြူထားသောဆဲလ်များ။
- နမူနာ lysis မှထုတ်လွှတ်သော RNA- ဤကိရိယာ၏ RT-qPCR နမူနာပုံစံအတွက်သာ သက်ဆိုင်ပါသည်။
- အစုံအလင်ကို အောက်ပါရည်ရွယ်ချက်များအတွက်အသုံးပြုနိုင်သည်- မျိုးရိုးဗီဇဖော်ပြမှုခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှု၊ siRNA-mediated gene silencing effect၊ ဆေးစစ်ခြင်းစသည်ဖြင့်။
ပုံကြမ်း
သိုလှောင်မှုနှင့် စင်သက်တမ်း
ဤကိရိယာ၏ အပိုင်း I ကို 4 ℃ တွင် သိမ်းဆည်းသင့်သည်။အပိုင်း II ကို -20 ℃ တွင်သိမ်းဆည်းထားသင့်သည်။
Foregene Protease Plus II ကို 4 တွင်သိမ်းဆည်းသင့်သည်။℃၊ -20 ℃ တွင် အေးခဲမနေပါနှင့်။
ဓါတ်ဆေး ၂×တိုက်ရိုက် qPCR Mix-SYBR ကို -20 တွင်သိမ်းဆည်းသင့်သည်။℃အမှောင်ထဲမှာ;မကြာခဏအသုံးပြုပါက 4 တွင်သိမ်းဆည်းနိုင်သည်။ရေတို သိုလှောင်မှု အတွက် ℃ (10 ရက်အတွင်း အသုံးပြုရန်)။
Real Time PCR primer ဒီဇိုင်းအခြေခံမူ
ရှေ့သို့ Primer နှင့် Reverse Primer
Real Time PCR အတွက်၊ primer ဒီဇိုင်းသည် အလွန်အရေးကြီးပါသည်။Primers များသည် PCR amplification ၏ တိကျမှုနှင့် ထိရောက်မှုတို့နှင့် ဆက်စပ်နေပြီး အောက်ပါအခြေခံမူများကို ကိုးကား၍ ဒီဇိုင်းထုတ်နိုင်သည်။
Primer အရှည်- 18-30bp။
GC ပါဝင်မှု- 40-60%။
Tm တန်ဖိုး- Primer 5 ကဲ့သို့သော Primer ဒီဇိုင်းဆော့ဖ်ဝဲသည် primer ၏ Tm တန်ဖိုးကို ပေးနိုင်သည်။အထက်ပိုင်းနှင့် အောက်ပိုင်း primers များ၏ Tm တန်ဖိုးများသည် တတ်နိုင်သမျှ နီးစပ်သင့်သည်။Tm တွက်ချက်မှုဖော်မြူလာကိုလည်း သုံးနိုင်သည်- Tm = 4°C (G + C) + 2°C (A + T)။PCR ကိုလုပ်ဆောင်သောအခါ၊ primer Tm တန်ဖိုး 5°C အောက်ရှိ အပူချိန်ကို annealing temperature အဖြစ် ယေဘူယျအားဖြင့် ရွေးချယ်သည် (သက်ဆိုင်ရာ အပူချိန်တိုးလာခြင်းသည် PCR တုံ့ပြန်မှု၏ တိကျမှုကို တိုးလာစေသည်)။
Primers နှင့် PCR ထုတ်ကုန်များ
ဒီဇိုင်း primer PCR amplification ထုတ်ကုန်အရှည်သည် 100-150bp ပိုကောင်းသည်။
ပုံစံပလိတ်၏ အလယ်တန်းဖွဲ့စည်းပုံဆိုင်ရာ ဧရိယာရှိ ဒီဇိုင်း primer များကို တတ်နိုင်သမျှ ရှောင်ရှားသင့်သည်။
အထက်ပိုင်းနှင့် မြစ်အောက်ပိုင်းရှိ ပလာစတာများ၏ 3′ စွန်းများကြားတွင် ဖြည့်စွက်အခြေ 2 ခု သို့မဟုတ် ထို့ထက်ပိုသော အခြေများဖွဲ့စည်းခြင်းကို ရှောင်ကြဉ်ပါ။
Primer 3′ terminal base သည် နောက်ထပ် 3 ဆက်တိုက် G သို့မဟုတ် C ဖြင့် မတည်ရှိနိုင်ပါ။
Primers များတွင် ၎င်းတို့ကိုယ်တိုင် ဖြည့်စွက်ဖွဲ့စည်းပုံများ မပါဝင်နိုင်ပါ၊ သို့မဟုတ်ပါက ဆံပင်ညှပ်ဖွဲ့စည်းပုံသည် PCR ချဲ့ထွင်မှုကို ထိခိုက်စေပါသည်။
ATCG ကို primer sequence တွင်တတ်နိုင်သမျှအညီအမျှဖြန့်ဝေသင့်ပြီး 3′ terminal base ကို T အဖြစ်ရှောင်ရှားသင့်သည်။
နောက်ဆက်တွဲ 1：Cell Direct RT-qPCR Kit အစိတ်အပိုင်း ဖြည့်စွက်စာထုပ်
1.Cell Lysis ဖြေရှင်းချက်
|
| |||
| Kit အစိတ်အပိုင်းများ (24-well lysis system/ well)၊ | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| အပိုင်းငါ | ကြားခံ CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| ကြားခံ ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| အပိုင်းII | DNA Eraser | 400 μl | 1 ml × 2 |
2.RT ရောသမမွှေပါ။
|
| |
| Kit အစိတ်အပိုင်းများ (20 μl တုံ့ပြန်မှုစနစ်) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× တိုက်ရိုက် RT ရောနှောခြင်း။ | 800 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1.7 ml × 2 |
|
| ||
| Kit အစိတ်အပိုင်းများ (20 μl တုံ့ပြန်မှုစနစ်) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× တိုက်ရိုက် qPCR ရောနှော-SYBR | 1 ml × 2 | 1.7 ml × 6 |
| 50× ROX ရည်ညွှန်းဆိုးဆေး | 40 μl | 200 μl |
| RNase-Free ddH2O | 1.7 ml | 10 ml |
ညွှန်ကြားချက်လက်စွဲများ-
