Escherichia Coli O157: H7 Nucleic Acid Detection Kit (PCR Fluorescent Probe Method/Lyophilization)
Kit ဖော်ပြချက်-
Cat.No.FP103
အစားအစာ၊ အစားအစာ၊ ရေနမူနာများနှင့် ပတ်ဝန်းကျင်နမူနာများတွင် E. coli O157:H7 ကို လျင်မြန်စွာ သိရှိနိုင်စေရန်နှင့် စစ်ဆေးမှုအတွက် အသုံးပြုပါသည်။
ဖော်ပြချက်
၎င်းကိုအသုံးပြုသည်။အစားအစာ၊ အစားအစာ၊ ရေနမူနာများနှင့် ပတ်ဝန်းကျင်နမူနာများတွင် E. coli O157:H7 ကို လျင်မြန်စွာ ရှာဖွေတွေ့ရှိပြီး စစ်ဆေးခြင်း။
[စမ်းသပ်မှုနိယာမ]
fluorescent PCR နည်းပညာ၏ နိယာမအရ၊ တိကျသော primers နှင့် Taqman probes များသည် Escherichia coli O157:H7 ၏ မျိုးရိုးဗီဇအတွက် ဒီဇိုင်းထုတ်ထားပြီး Escherichia coli O157:H7 ၏ DNA အရည်အသွေးကို ထောက်လှမ်းသိရှိနိုင်ရန် fluorescent PCR ကိရိယာဖြင့် ရှာဖွေတွေ့ရှိပါသည်။
Kit Contents
မှတ်ချက်- ROX ချန်နယ်စုံစမ်းစစ်ဆေးမှု မပါဝင်ပါ။
| Cအစိတ်အပိုင်းများ | သတ်မှတ်ချက် | Qပမာဏ |
| ကြားခံ A | အဝီစိ | 1 |
| Buffer B | အဝီစိ | 1 |
| အပြုသဘောဆောင်သောထိန်းချုပ်မှု | အဝီစိ | 1 |
| အပျက်သဘောဆောင်သည်။ | အဝီစိ | 1 |
မျှော်မှန်းအသုံးပြုမှု
၎င်းကိုအသုံးပြုသည်။ အစားအစာ၊ အစားအစာ၊ ရေနမူနာများနှင့် ပတ်ဝန်းကျင်နမူနာများတွင် E. coli O157:H7 ကို လျင်မြန်စွာ ရှာဖွေတွေ့ရှိပြီး စစ်ဆေးခြင်း။
သိုလှောင်မှုအခြေအနေများနှင့် သက်တမ်းကုန်ဆုံးရက်စွဲ
အမှောင်ထဲတွင် -20 ℃ သိမ်းဆည်းပြီး ထပ်ခါတလဲလဲ အေးခဲပြီး အရည်ပျော်ခြင်းကို ရှောင်ကြဉ်ပါ။
တရားဝင်ကာလသည် 12 ဖြစ်သည်။လများနှင့် ထုတ်လုပ်မှုရက်စွဲကို ပြင်ပထုပ်ပိုးမှုတွင် ပြသထားသည်။
တူရိယာများနှင့် စားသုံးကုန်များ
ရောင်ရမ်းမှု ပမာဏ PCR တူရိယာ၊ ပိုက်ပိုက်သေနတ်နှင့် ကိုက်ညီသော အကြံပြုချက်များ၊ ရေပြန်လှိုင်း ဖျော်စက်၊ အသေးစား အာရုံခံကိရိယာ။
အသုံးပြုမှု
1. နမူနာလုပ်ဆောင်ခြင်း။
1.1 နမူနာအမျိုးအစား- ဤကိရိယာသည် အစားအစာ၊ အစားအစာ၊ ရေနမူနာများနှင့် Escherichia coli O157:H7 မှ ညစ်ညမ်းသည်ဟု သံသယရှိနိုင်သော အခြားနမူနာများအတွက် သင့်လျော်သည်။နက်ရှိုင်းစွာ ပြုပြင်ထားသော အသားထွက်ကုန်များ၊ အဖျော်ယမကာများနှင့် ဆိုးဆေးများပါရှိသော အခြားဒြပ်ပစ္စည်းများအတွက် fluorescence အချက်ပြစုစည်းမှုကို မထိခိုက်စေရန် ၎င်းတို့ကို ဆေးကြောရန် လိုအပ်ပါသည်။
1.2 နမူနာလုပ်ဆောင်ခြင်း- "GB 4789.10-2016 အစားအစာဘေးကင်းလုံခြုံရေး အမျိုးသားစံနှုန်းအစားအသောက် Escherichia coli O157: H7 စမ်းသပ်ခြင်း" ကို ကိုးကား၍ နမူနာပြင်ဆင်မှု၊ ကြွယ်ဝမှုယဉ်ကျေးမှုနှင့် Escherichia coli O157:H7 တို့ကို သီးခြားခွဲထုတ်ခြင်းအား ကိုးကားပါ။
- Nucleic acid ထုတ်ယူခြင်း။
1.5 mL centrifuge tube တွင် 20 mL ကြွယ်ဝသော ဖျော်ရည်ကိုယူပြီး၊ microbial lysate 200 μL (နောက်ထပ် kit လိုအပ်သည်)၊ vortex ကို စက္ကန့် 30 ကြာ၊ centrifuge အတိုချုံးပြီး ဖယ်ထားပါ။
မှတ်ချက်။
3. Nucleic Acid ချဲ့ထွင်ခြင်း။
3.1 အသုံးပြုရန်အတွက် fluorescent quantitative PCR တူရိယာကိုဖွင့်ပါ။
အစုံလိုက်မှ Buffer A နှင့် Buffer B ကို နှိုက်နှိုက်ချွတ်ချွတ် အရည်ပျော်ပြီး တိုတိုတုတ်တုတ် centrifuge ။PCR တုံ့ပြန်မှုပြွန်တစ်ခုစီတွင် 18 μL Buffer A နှင့် 2 μL Buffer B ကိုထည့်ပါ။ထို့နောက် အနုတ်လက္ခဏာထိန်းချုပ်မှုတစ်ခုစီကို 5 mL ၊ ထုတ်ယူထားသော nucleic acid နှင့် အပြုသဘောဆောင်သောထိန်းချုပ်မှုကို PCR တုံ့ပြန်မှုပြွန်များထဲသို့ထည့်ကာ၊ ပြွန်များကိုဖုံးကာ၊ နှင့် တိုတောင်းသော centrifuge ကိုထည့်ပါ။
3.3 PCR တုံ့ပြန်မှုပြွန်ကို fluorescent PCR စက်သို့ လွှဲပြောင်းပြီး ချဲ့ထွင်စမ်းသပ်မှုများ လုပ်ဆောင်ရန် အောက်ပါနည်းလမ်းများကို အသုံးပြုပါ- တုံ့ပြန်မှုစနစ်အတွက် 25 mL ကို ရွေးချယ်ပါ၊ သံသရာတစ်ခုစီအတွက် 60°C တွင် fluorescence အချက်ပြမှုများကို စုဆောင်းကာ ထောက်လှမ်းမှုချန်နယ်အတွက် FAM ကို ရွေးချယ်ပါ။
| အဆင့် | အစီအစဉ် | သံသရာအရေအတွက် |
| 1 | 37 ℃ 5 မိနစ် | 1 |
| 2 | 9 5 ℃ 3min | 1 |
| 3 | 95°C 15s | ၄ဝ၀ |
| 60 ℃ 30s (မီးချောင်းစုစည်းမှု) |
ပြဿနာများကိုခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာရန်လမ်းညွှန်များ
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
RNA ကို မထုတ်ယူနိုင်ပါ သို့မဟုတ် nucleic acid ၏ အထွက်နှုန်းနည်းသည်။
ပြန်လည်ရယူခြင်းဆိုင်ရာ ထိရောက်မှုအပေါ် သက်ရောက်မှုရှိသော အကြောင်းရင်းများစွာရှိပါသည်၊ ဥပမာ- RNA အကြောင်းအရာ၊ လုပ်ဆောင်ချက်နည်းလမ်း၊ elution volume စသည်ဖြင့်။
အဖြစ်များသော အကြောင်းရင်းများကို လေ့လာခြင်း-
လည်ပတ်နေစဉ်အတွင်း 1.Ice bath သို့မဟုတ် low-temperature (4°C) centrifugation။
အကြံပြုချက်- အခန်းအပူချိန် (15-25 ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်) လုပ်ဆောင်ချက်၊ ရေခဲရေချိုးခြင်းနှင့် အပူချိန်နိမ့်သော အာရုံခံကိရိယာကို ဘယ်တော့မှ မပြုလုပ်ပါနှင့်။
2. မသင့်လျော်သောနမူနာသိုလှောင်မှု သို့မဟုတ် နမူနာသိုလှောင်မှုမှာ ကြာမြင့်လွန်းသည်။
အကြံပြုချက်- နမူနာများကို -80 ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်တွင် သိမ်းဆည်းပါ သို့မဟုတ် နိုက်ထရိုဂျင်အရည်တွင် အေးခဲကာ ထပ်ခါတလဲလဲ အေးခဲနေသော ဖျော်ရည်များကို ရှောင်ကြဉ်ပါ။RNA ထုတ်ယူမှုအတွက် လတ်ဆတ်စွာ စုဆောင်းထားသော နမူနာများကို အသုံးပြုကြည့်ပါ။
3. နမူနာ lysis မလုံလောက်ခြင်း။
အကြံပြုချက်- နမူနာနှင့် အလုပ်လုပ်သောဖြေရှင်းချက် (Linear Acrylamide) ကို အခန်းအပူချိန် (15-25 ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်) တွင် 10 မိနစ်ကြာ နှံ့စပ်အောင် ရောစပ်ထားကြောင်း သေချာပါစေ။
4. The eluent ကို မှားယွင်းစွာ ထည့်ထားပါသည်။
အကြံပြုချက်- RNase-Free ddH2O ကို သန့်စင်သောကော်လံ၏ အမြှေးပါးအလယ်တွင် ထည့်ထားကြောင်း သေချာပါစေ။
5. Buffer viRW2 တွင် မသင့်လျော်သော ပမာဏမရှိသော အီသနော
အကြံပြုချက်- ညွှန်ကြားချက်များကို လိုက်နာပါ၊ မှန်ကန်သော အဟိုက်ဒရိတ် အီသနော၏ ပမာဏကို Buffer viRW2 တွင် ထည့်ပြီး ကိရိယာအသုံးမပြုမီ ၎င်းတို့ကို ကောင်းစွာရောမွှေပါ။
6. မသင့်လျော်သောနမူနာအသုံးပြုမှု။
အကြံပြုချက်- Buffer viRL ၏ 500μl လျှင် နမူနာ 200µl။နမူနာပမာဏ အလွန်အကျွံ RNA ထုတ်ယူမှုနှုန်းကို လျော့ကျစေပါသည်။
7.Improper elution volume သို့မဟုတ် မပြည့်စုံသော elution။
အကြံပြုချက်- သန့်စင်ရေးကော်လံ၏ ထင်ရှားသော ပမာဏမှာ 30-50μl ဖြစ်သည်။elution အကျိုးသက်ရောက်မှု အဆင်မပြေပါက၊ ကြိုတင်အပူပေးထားသော RNase-Free ddH ကို ထည့်ရန် အကြံပြုပါသည်။2O နှင့် 5-10min ကဲ့သို့သော အခန်းအပူချိန်တွင် နေရာချချိန်ကို တိုးချဲ့ပါ။
8. သန့်စင်ရေးကော်လံတွင် Buffer viRW2 တွင် ဆေးကြောပြီးနောက် အီသနောအကြွင်းအကျန်ရှိသည်။
အကြံပြုချက်- Buffer viRW2 နှင့် ပိုက်အချည်းနှီးသော အာရုံစူးစိုက်မှုတွင် 2 မိနစ်ကြာ ဆေးကြောပြီးနောက် အီသနော ကျန်နေသေးပါက၊ ကျန်ရှိသော အီသနောကို အပြည့်အ၀ဖယ်ရှားရန် သန့်စင်သောကော်လံကို အခန်းအပူချိန်တွင် 5 မိနစ်ကြာထားနိုင်သည်။
သန့်စင်သော RNA မော်လီကျူးများ ပျက်စီးယိုယွင်းခြင်း။
သန့်စင်ထားသော RNA ၏အရည်အသွေးသည် နမူနာသိုလှောင်မှု၊ RNase ညစ်ညမ်းမှုနှင့် လည်ပတ်မှုစသည့်အချက်များနှင့် ဆက်စပ်နေသည်။
အဖြစ်များသော အကြောင်းရင်းများကို လေ့လာခြင်း-
1.စုဆောင်းထားသောနမူနာများကို အချိန်မီမသိမ်းဆည်းပါ။
အကြံပြုချက်- နမူနာကို စုဆောင်းပြီးနောက် အချိန်မီ အသုံးမပြုပါက၊ ၎င်းကို -80 ℃ သို့မဟုတ် နိုက်ထရိုဂျင်အရည်တွင် ချက်ချင်းသိမ်းဆည်းပါ။RNA မော်လီကျူးများ ထုတ်ယူရန်အတွက် ဖြစ်နိုင်လျှင် လတ်လတ်ဆတ်ဆတ် စုဆောင်းထားသော နမူနာများကို သုံးကြည့်ပါ။
2. စုဆောင်းထားသောနမူနာများသည် အေးခဲပြီး ထပ်ခါထပ်ခါ အရည်ပျော်နေပါသည်။
အကြံပြုချက်- နမူနာစုဆောင်းခြင်းနှင့် သိမ်းဆည်းစဉ်အတွင်း ထပ်ခါတလဲလဲ အေးခဲခြင်းနှင့် အရည်ပျော်ခြင်းကို ရှောင်ကြဉ်ပါ၊ သို့မဟုတ်ပါက nucleic acid ၏ အထွက်နှုန်း လျော့နည်းသွားပါမည်။
3.RNase ကို ခွဲစိတ်ခန်းတွင် မိတ်ဆက်ခဲ့သည် သို့မဟုတ် တစ်ခါသုံးလက်အိတ်များ၊ မျက်နှာဖုံးများ စသည်တို့ကို မဝတ်ဆင်ပါ။
အကြံပြုချက်- RNA မော်လီကျူးစမ်းသပ်ချက်အား သီးခြား RNA ခွဲစိတ်ခန်းတွင် အကောင်းဆုံးလုပ်ဆောင်ပြီး စမ်းသပ်မှုဇယားကို စမ်းသပ်မှုမပြုမီ သန့်စင်ထားသည်။RNase နိဒါန်းကြောင့် ဖြစ်ရသည့် RNA ပျက်စီးမှုကို ရှောင်ရှားရန် စမ်းသပ်မှုအတွင်း တစ်ခါသုံးလက်အိတ်များနှင့် နှာခေါင်းစည်းများ ဝတ်ဆင်ပါ။
4. အသုံးပြုနေစဉ်အတွင်း RNase မှ ညစ်ညမ်းသော ဓါတ်ပစ္စည်းများကို ညစ်ညမ်းစေပါသည်။
အကြံပြုချက်- ဆက်စပ်စမ်းသပ်မှုများအတွက် Viral RNA Isolation Kit အသစ်ဖြင့် အစားထိုးပါ။
5.Centrifuge tubes များ၊ pipette tips စသည်တို့၏ညစ်ညမ်းမှု RNase အကြံပြုချက်- centrifuge tubes၊ pipette tips နှင့် pipettes များအားလုံး RNase-free ဖြစ်ကြောင်း သေချာပါစေ။
သန့်စင်ထားသော RNA မော်လီကျူးများသည် ရေအောက်ပိုင်း စမ်းသပ်မှုများကို ထိခိုက်စေပါသည်။
သန့်စင်ရေးကော်လံမှ သန့်စင်ထားသော RNA မော်လီကျူးများသည်- ဆားအိုင်းယွန်း သို့မဟုတ် ပရိုတင်းများ အလွန်အကျွံရှိနေပါက- ပြောင်းပြန်ကူးယူခြင်း၊ Northern Blot စသည်တို့ကဲ့သို့သော ဆားအိုင်းယွန်းများ သို့မဟုတ် ပရိုတင်းများ အလွန်အကျွံရှိနေပါက ရေအောက်စမ်းသပ်မှုများကို အကျိုးသက်ရောက်မည်ဖြစ်ပါသည်။
1. eluted RNA မော်လီကျူးများတွင် ဆားအိုင်းယွန်းများ ကျန်ရှိနေပါသည်။
အကြံပြုချက်- Buffer viRW2 တွင် မှန်ကန်သော မဟိုက်ဒရော့စသော အီသနော၏ ပမာဏကို ထည့်ပြီး သန့်စင်ရေးကော်လံကို လည်ပတ်မှု ညွှန်ကြားချက်တွင် မှန်ကန်သော အာရုံစူးစိုက်မှုအမြန်နှုန်းအတိုင်း နှစ်ကြိမ်ဆေးကြောပါ ；ဆားအိုင်းယွန်းများ ကျန်ရှိနေသေးပါက၊ Buffer viRW2 ကို သန့်စင်ရေးကော်လံတွင် Buffer viRW2 ပေါင်းထည့်နိုင်ပြီး အခန်းအပူချိန်တွင် 5 မိနစ်ကြာ ထားလိုက်ပါ။ထို့နောက် ဆားအိုင်းယွန်းညစ်ညမ်းမှုကို အကြီးကျယ်ဆုံးအတိုင်းအတာအထိ ဖယ်ရှားရန် ဗဟိုချုပ်ကိုင်မှုပြုလုပ်ပါ။
2. eluted RNA မော်လီကျူးများတွင် အီသနော ကျန်ရှိပါသည်။
အကြံပြုချက်- Buffer viRW2 မှ သန့်စင်သောကော်လံများကို ဆေးကြောပြီးကြောင်း အတည်ပြုပြီးသည်နှင့်၊ လည်ပတ်မှုညွှန်ကြားချက်ရှိ centrifugal အမြန်နှုန်းအတိုင်း ပြွန်အလွတ် centrifugation ပြုလုပ်ပါ။အီသနောကျန်နေသေးပါက၊ ၎င်းကို အကြီးကျယ်ဆုံးအတိုင်းအတာအထိ ဖယ်ထုတ်ရန်အတွက် ပြွန်အလွတ်ဖြင့် ဗဟိုပြု၍ 5 မိနစ်ခန့်ထားနိုင်သည်။
ညွှန်ကြားချက်လက်စွဲများ-
Viral RNA Isolation Kit ညွှန်ကြားချက်လက်စွဲ
