Foreasy Taq DNA Polymerase
ဖော်ပြချက်
Foreasy Taq DNA Polymerase သည် မျိုးဗီဇပြန်လည်ပေါင်းစပ်နည်းပညာဖြင့် Escherichia coli အင်ဂျင်နီယာဘက်တီးရီးယားတွင်ဖော်ပြသည့် Taq အင်ဇိုင်းအသစ်ဖြစ်သည်။အင်ဇိုင်းကိုယ်တိုင်က အချို့သော hot-start လုပ်ဆောင်မှုရှိပြီး သမားရိုးကျ PCR နှင့် qPCR အတွက် အသုံးပြုနိုင်သည်။၎င်းတွင် 5'→3' DNA polymerase လုပ်ဆောင်ချက်နှင့် 5'→3' exonuclease လုပ်ဆောင်ချက် ပါဝင်သော်လည်း 3'→5' exonuclease လုပ်ဆောင်ချက်မရှိပါ။
Kit အစိတ်အပိုင်းများ
အစိတ်အပိုင်း | IM-01011 | IM-01012 | IM-01013 |
Foreasy Taq DNA Polymerase(5 U/μL) | 5000 U (1 mL) | 50 KU (10 mL) | 500 KU (100 mL) |
2× Taq တုံ့ပြန်မှုကြားခံ | 25 mL ×5 | 250 mL ×5 | 500 mL ×25 |
အင်္ဂါရပ်များနှင့် အားသာချက်များ
- မြင့်မားသောတိကျမှု- အင်ဇိုင်းသည် အချို့သော ပူပြင်းသော-စတင်လုပ်ဆောင်မှုရှိသည်။
- မြန်ဆန်သောချဲ့ထွင်မှု- 10 စက္ကန့်/ kb ။
- အလွန်လိုက်လျောညီထွေရှိသော ပုံစံပလိတ်- GC မြင့်မားသောတန်ဖိုး၊ ချဲ့ထွင်ရန်ခက်ခဲသော DNA ပုံစံမျိုးစုံကို ထိထိရောက်ရောက်ချဲ့ထွင်ရန် အသုံးပြုနိုင်သည်။
- ခိုင်မာသောသစ္စာရှိမှု - သာမန် Taq Enzyme 6 ကြိမ်။
- ခိုင်ခံ့သောအပူတည်ငြိမ်မှု- 37°C တွင် တစ်ပတ်ကြာ ထားနိုင်ပြီး လှုပ်ရှားမှု 90% ကို ထိန်းသိမ်းထားနိုင်သည်။
Kit လျှောက်လွှာ
အမျိုးမျိုးသော PCR/qPCR စနစ်များနှင့် တိုက်ရိုက် PCR စနစ်များ
DNA အပိုင်းအစများကို PCR ချဲ့ခြင်း။
DNA တံဆိပ်တပ်ခြင်း။
DNA စီစစ်ခြင်း။
PCR Aမြီး
U အဓိပ္ပါယ်
1U- 74°C တွင် 30 ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်တွင် မိနစ် 30 ကြာ ဆော်လမွန်သုက်ပိုး DNA ကို အသုံးပြု၍ အက်ဆစ်-မပျော်ဝင်နိုင်သော အရာအဖြစ် 10 nmol deoxynucleotides ၏ 10 nmol ပေါင်းစပ်ရန် လိုအပ်သော အင်ဇိုင်းပမာဏ။
တုံ့ပြန်မှုအခြေအနေ
အပူချိန် | အချိန် | သံသရာ |
37°C | ၅ မိနစ် | 1 |
94°C | ၅ မိနစ် | 1 |
94°C | 10 စက္ကန့် | 35 |
60°C | 10 စက္ကန့် | |
72°C | 20 sec/kb | |
72°C | 2 မိနစ် | 1 |
သိုလှောင်မှု
-20 ± 5°C တွင် 2 နှစ် သို့မဟုတ် -80°C တွင် ရေရှည်သိုလှောင်ရန်။
ချဲ့ထွင်မှုအချက်ပြမှုများမရှိပါ။
1. Kit အတွင်းရှိ Taq DNA Polymerase သည် မသင့်လျော်သော သိုလှောင်မှု သို့မဟုတ် သက်တမ်းကုန်ဆုံးခြင်းကြောင့် ၎င်း၏လုပ်ဆောင်ချက် ဆုံးရှုံးသွားပါသည်။
အကြံပြုချက်- ကိရိယာအစုံ၏ သိုလှောင်မှုအခြေအနေများကို အတည်ပြုပါ။သင့်လျော်သော Taq DNA Polymerase ပမာဏကို PCR စနစ်သို့ ပြန်လည်ထည့်ပါ သို့မဟုတ် ဆက်စပ်စမ်းသပ်မှုများအတွက် Real Time PCR Kit အသစ်ကို ဝယ်ယူပါ။
2. DNA နမူနာပုံစံတွင် Taq DNA Polymerase ၏ inhibitors အများအပြားရှိသည်။
အကြံပြုချက်- ပုံစံပလိတ်ကို ပြန်လည်သန့်စင်ပါ သို့မဟုတ် အသုံးပြုသည့် ပုံစံပလိတ်ပမာဏကို လျှော့ချပါ။
3.Mg2+ အာရုံစူးစိုက်မှုသည် မသင့်တော်ပါ။
အကြံပြုချက်- ကျွန်ုပ်တို့ပေးဆောင်သော 2× Real PCR Mix ၏ Mg2+ အာရုံစူးစိုက်မှုသည် 3.5mM ဖြစ်သည်။သို့သော်၊ အထူး primers နှင့် templates အချို့အတွက် Mg2+ အာရုံစူးစိုက်မှုသည် ပိုမိုမြင့်မားနိုင်သည်။ထို့ကြောင့်၊ သင်သည် Mg2+ အာရုံစူးစိုက်မှုကို အကောင်းဆုံးဖြစ်အောင် MgCl2 ကို တိုက်ရိုက်ထည့်နိုင်သည်။ပိုမိုကောင်းမွန်အောင်ပြုလုပ်ရန် အချိန်တိုင်း Mg2+ 0.5mM ကို တိုးမြှင့်ရန် အကြံပြုထားသည်။
4.PCR ချဲ့ထွင်မှုအခြေအနေများသည် မသင့်လျော်ပါ၊ နှင့် primer အစီအစဥ် သို့မဟုတ် အာရုံစူးစိုက်မှုမှာ မသင့်လျော်ပါ။
အကြံပြုချက်- primer sequence ၏ မှန်ကန်မှုကို အတည်ပြုပြီး primer သည် မပျက်စီးသေးပါ။amplification signal မကောင်းပါက၊ annealing temperature ကို လျှော့ချပြီး primer concentration ကို သင့်လျော်သလို ချိန်ညှိပါ။
5. ပုံစံခွက်ပမာဏသည် အလွန်နည်းသည် သို့မဟုတ် အလွန်များသည်။
အကြံပြုချက်- နမူနာပုံစံ linearization gradient dilution ကိုလုပ်ဆောင်ပြီး Real Time PCR စမ်းသပ်မှုအတွက် အကောင်းဆုံး PCR အကျိုးသက်ရောက်မှုဖြင့် ပုံစံပလိတ်အာရုံစူးစိုက်မှုကို ရွေးချယ်ပါ။
NTC တွင် fluorescence တန်ဖိုး အလွန်မြင့်မားသည်။
1. လည်ပတ်နေစဉ်အတွင်း ဖြစ်ပေါ်လာသော ညစ်ညမ်းရေဓါတ်။
အကြံပြုချက်- အချိန်နှင့်တပြေးညီ PCR စမ်းသပ်မှုများအတွက် ဓာတ်ကူပစ္စည်းအသစ်များဖြင့် အစားထိုးပါ။
2.PCR တုံ့ပြန်မှုစနစ်၏ပြင်ဆင်မှုအတွင်းညစ်ညမ်းမှုဖြစ်ပေါ်ခဲ့သည်။
အကြံပြုချက်- လည်ပတ်နေစဉ်အတွင်း လိုအပ်သောအကာအကွယ်အစီအမံများဖြစ်သည့်- ရော်ဘာလက်အိတ်များဝတ်ဆင်ခြင်း၊ ဇကာပါသောပိုက်အစွန်အဖျားကိုအသုံးပြုခြင်း စသည်ဖြင့်၊
3. Primers များသည် ပျက်စီးသွားပြီး primers များ ပျက်စီးခြင်းသည် အတိအကျမဟုတ်သော ချဲ့ထွင်မှုကို ဖြစ်စေသည်။
အကြံပြုချက်- Primer များ ပျက်စီးသွားခြင်း ရှိ၊ မရှိ သိရှိရန် SDS-PAGE electrophoresis ကိုသုံး၍ Real Time PCR စမ်းသပ်မှုများအတွက် primers အသစ်များဖြင့် အစားထိုးပါ။
Primer dimer သို့မဟုတ် အတိအကျမဟုတ်သော အသံချဲ့စက်
1.Mg2+ အာရုံစူးစိုက်မှု မသင့်တော်ပါ။
အကြံပြုချက်- ကျွန်ုပ်တို့ပေးဆောင်သော 2× Real PCR EasyTM Mix ၏ Mg2+ အာရုံစူးစိုက်မှုသည် 3.5 mM ဖြစ်သည်။သို့သော်၊ အထူး primers နှင့် templates အချို့အတွက် Mg2+ အာရုံစူးစိုက်မှုသည် ပိုမိုမြင့်မားနိုင်သည်။ထို့ကြောင့်၊ သင်သည် Mg2+ အာရုံစူးစိုက်မှုကို အကောင်းဆုံးဖြစ်အောင် MgCl2 ကို တိုက်ရိုက်ထည့်နိုင်သည်။ပိုမိုကောင်းမွန်အောင်ပြုလုပ်ရန် အချိန်တိုင်း Mg2+ 0.5mM ကို တိုးမြှင့်ရန် အကြံပြုထားသည်။
2.PCR annealing အပူချိန် အလွန်နိမ့်သည်။
အကြံပြုချက်- တစ်ကြိမ်စီတွင် PCR annealing temperature ကို 1 ℃ သို့မဟုတ် 2 ℃ တိုးပေးပါ။
3.PCR ထုတ်ကုန်သည် ရှည်လွန်းသည်။
အကြံပြုချက်- Real Time PCR ထုတ်ကုန်၏ကြာချိန်သည် 100-150bp အကြားဖြစ်သင့်သည်၊ 500bp ထက်မပိုပါ။
4. Primers များသည် ဆုတ်ယုတ်သွားကာ primers များ၏ ယိုယွင်းမှုသည် တိကျသော အသံချဲ့စက်၏ အသွင်အပြင်ကို ဦးတည်သွားစေမည်ဖြစ်သည်။
အကြံပြုချက်- Primer များ ပျက်စီးသွားခြင်း ရှိ၊ မရှိ သိရှိရန် SDS-PAGE electrophoresis ကိုသုံး၍ Real Time PCR စမ်းသပ်မှုများအတွက် primers အသစ်များဖြင့် အစားထိုးပါ။
5.PCR စနစ်သည် မသင့်လျော်ပါ၊ သို့မဟုတ် စနစ်သည် သေးငယ်လွန်းသည်။
အကြံပြုချက်- PCR တုံ့ပြန်မှုစနစ်သည် သေးငယ်လွန်းသဖြင့် ထောက်လှမ်းမှု တိကျမှုကို လျော့ကျစေမည်ဖြစ်သည်။Real Time PCR စမ်းသပ်မှုကို ပြန်လည်လုပ်ဆောင်ရန်အတွက် အရေအတွက် PCR ကိရိယာမှ အကြံပြုထားသည့် တုံ့ပြန်မှုစနစ်ကို အသုံးပြုခြင်းသည် အကောင်းဆုံးဖြစ်သည်။
အရေအတွက်တန်ဖိုးများ ထပ်တလဲလဲနိုင်မှု ညံ့ဖျင်းသည်။
1. ကိရိယာ ချွတ်ယွင်းနေသည်။
အကြံပြုချက်- တူရိယာ၏ PCR အပေါက်တစ်ခုစီကြားတွင် အမှားအယွင်းများ ရှိနိုင်သည်၊ အပူချိန် စီမံခန့်ခွဲခြင်း သို့မဟုတ် ထောက်လှမ်းမှုအတွင်း မျိုးပွားနိုင်စွမ်း ညံ့ဖျင်းမှု ဖြစ်ပေါ်နိုင်သည်။သက်ဆိုင်ရာကိရိယာ၏ ညွှန်ကြားချက်အတိုင်း စစ်ဆေးပါ။
2.နမူနာ သန့်ရှင်းမှုသည် မကောင်းပါ။
အကြံပြုချက်- မသန့်ရှင်းသောနမူနာများသည် ပုံစံပလိတ်နှင့် primer များ၏ သန့်ရှင်းမှုပါဝင်သည့် စမ်းသပ်မှု၏ ညံ့ဖျင်းသော ပြန်လည်ထုတ်လုပ်နိုင်စွမ်းကို ဖြစ်ပေါ်စေလိမ့်မည်။နမူနာပုံစံကို ပြန်လည်သန့်စင်ခြင်းသည် အကောင်းဆုံးဖြစ်ပြီး primers များကို SDS-PAGE ဖြင့် အကောင်းဆုံးသန့်စင်ထားပါသည်။
3.PCR စနစ်ပြင်ဆင်မှုနှင့် သိုလှောင်မှုအချိန်သည် ရှည်လွန်းသည်။
အကြံပြုချက်- ပြင်ဆင်ပြီးပြီးချင်း PCR စမ်းသပ်မှုအတွက် အချိန်နှင့်တပြေးညီ PCR စနစ်ကို အသုံးပြုပါ၊ ၎င်းကို အချိန်အကြာကြီး မထားခဲ့ပါနှင့်။
4.PCR ချဲ့ထွင်မှုအခြေအနေများသည် မသင့်လျော်ပါ၊ နှင့် primer အစီအစဥ် သို့မဟုတ် အာရုံစူးစိုက်မှုမှာ မသင့်လျော်ပါ။
အကြံပြုချက်- primer sequence ၏ မှန်ကန်မှုကို အတည်ပြုပြီး primer သည် မပျက်စီးသေးပါ။amplification signal မကောင်းပါက၊ annealing temperature ကို လျှော့ချပြီး primer concentration ကို သင့်လျော်သလို ချိန်ညှိပါ။
5.PCR စနစ်သည် မသင့်လျော်ပါ၊ သို့မဟုတ် စနစ်သည် သေးငယ်လွန်းသည်။
အကြံပြုချက်- PCR တုံ့ပြန်မှုစနစ်သည် သေးငယ်လွန်းသဖြင့် ထောက်လှမ်းမှု တိကျမှုကို လျော့ကျစေမည်ဖြစ်သည်။Real Time PCR စမ်းသပ်မှုကို ပြန်လည်လုပ်ဆောင်ရန်အတွက် အရေအတွက် PCR ကိရိယာမှ အကြံပြုထားသည့် တုံ့ပြန်မှုစနစ်ကို အသုံးပြုခြင်းသည် အကောင်းဆုံးဖြစ်သည်။