Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG Direct PCR Lysis Reagent(Mouse Tail)(မျိုးရိုးလိုက်ခြင်းအတွက်)
ဖော်ပြချက်
ဤကိရိယာသည် PCR တုံ့ပြန်မှုများအတွက် မောက်စ်အမြီးများ၊ နားများ၊ ကြွက်သားများနှင့် အခြားတစ်ရှူးနမူနာများမှ မျိုးဗီဇ DNA ကို လျင်မြန်စွာထုတ်လွှတ်ရန် ထူးခြားသော lysis ကြားခံစနစ်ကို အသုံးပြုထားသောကြောင့် ၎င်းသည် အကြီးစားမျိုးရိုးဗီဇစစ်ဆေးမှုအတွက် အထူးသင့်လျော်ပါသည်။
lysis ကြားခံမှ genomic DNA ကို ထုတ်လွှတ်သည့် လုပ်ငန်းစဉ်သည် 65°C တွင် 10-30 မိနစ်အတွင်း ပြီးဆုံးသည်။ပရိုတင်းနှင့် RNA ဖယ်ရှားခြင်းကဲ့သို့သော အခြားလုပ်ငန်းစဉ်များ မလိုအပ်ဘဲ၊ ထွက်ရှိလာသော ခြေရာခံ DNA ကို PCR တုံ့ပြန်မှုအတွက် ပုံစံပလိတ်အဖြစ် အသုံးပြုနိုင်သည်။
2× M1-PCR လွယ်ကူသည်။TMMix (UNG) သည် 2× M1-PCR လွယ်ကူမှုကို အခြေခံ၍ dTTP အစား dUTP ကို အသုံးပြုသည်TM (UNG) ကို ရောနှောပြီး dUTP ပါရှိသော ပုံစံခွက်ကို တချိန်တည်းတွင် ပြိုကွဲစေမည့် UNG အင်ဇိုင်း (Uracil-N-glycosylase) ကို ပေါင်းထည့်သည်။PCR တုံ့ပြန်မှုမပြုမီ၊ UNG အင်ဇိုင်းကို uracil ပါရှိသော PCR ထုတ်ကုန်ကို ဖြိုခွဲရန်အတွက် အသုံးပြုသည်။UNG အင်ဇိုင်းသည် uracil ပါ၀င်ခြင်းမရှိသော ပုံစံပြားအပေါ် မည်သည့်အကျိုးသက်ရောက်မှုမှ ရှိမည်မဟုတ်ပါ၊ ထို့ကြောင့် ချဲ့ထွင်ခြင်း၏ တိကျမှုနှင့် တိကျမှုကို သေချာစေပြီး အကြီးစားမျိုးဗီဇစမ်းသပ်မှု ဖြစ်နိုင်ခြေကို တားဆီးပေးသည်။PCR ထုတ်ကုန်များ ညစ်ညမ်းမှု ဖြစ်ပေါ်ခဲ့သည်။
D-Taq DNA polymerase သည် တိုက်ရိုက် PCR တုံ့ပြန်မှုများအတွက် Foregene မှ အထူးထုတ်လုပ်ထားသော DNA polymerase ဖြစ်သည်။D-Taq DNA polymerase သည် PCR တုံ့ပြန်မှုတားဆေးအမျိုးမျိုးကို ပြင်းထန်စွာခံနိုင်ရည်ရှိပြီး ရှုပ်ထွေးသောတုံ့ပြန်မှုစနစ်အမျိုးမျိုးတွင် DNA ၏ခြေရာခံပမာဏကို ထိရောက်စွာချဲ့ထွင်နိုင်ပြီး Direct PCR တုံ့ပြန်မှုအတွက် အထူးသင့်လျော်သည့် 2Kb/min သို့ရောက်ရှိနိုင်သည်။
သတ်မှတ်ချက်များ
50×20µl rxns၊ 200×20µl rxns၊ 500×20µl rxns၊ 2000×20µl rxns
Kit အစိတ်အပိုင်းများ
အပိုင်း | ကြားခံအမတ် |
Foregene Protease Plus | |
6× DNA Loading Buffer | |
ဒုတိယပိုင်း | 2× M1 PCR လွယ်ကူသည်။TMရောနှော(UNG) |
ညွှန်ကြားချက်များ |
အင်္ဂါရပ်များနှင့် အားသာချက်များ
■အချိန်ကုန်ပြီး ဈေးကြီးသော DNA သန့်စင်ရန် မလိုအပ်ပါ။
■ နမူနာလိုအပ်ချက်သည် သေးငယ်သည်၊ 5mg mouse တစ်ရှူး သို့မဟုတ် 2-5mm mouse tail ကို စမ်းသပ်နိုင်သည်။
■ ကြိတ်ခွဲခြင်းနှင့် ကြိတ်ခြင်းကဲ့သို့သော အထူးကုသမှုများ မလိုအပ်ဘဲ ခွဲစိတ်မှုမှာ ရိုးရှင်းပါသည်။
■ အကောင်းဆုံးပြင်ဆင်ထားသော PCR စနစ်သည် PCR တွင် ပိုမိုတိကျမှုနှင့် PCR တုံ့ပြန်မှုတားဆေးများကို ပိုမိုခံနိုင်ရည်ရှိစေသည်။
■ ညစ်ညမ်းမှုတိုက်ဖျက်ရေး PCR စနစ် ၂×M1-PCR လွယ်ကူသည်။TMPCR ထုတ်ကုန်များကြောင့်ဖြစ်ပေါ်လာသော လေထုညစ်ညမ်းမှုကို ထိရောက်စွာဖယ်ရှားပေးပြီး အသံချဲ့စက်၏တိကျမှုနှင့် တိကျမှုကို သေချာစေသည့် Mix (UNG)။
Kit ဘောင်များ
အသုံးချမှုနယ်ပယ်- ကြွက်အမြီး၊ ကြွက်နားရွက်၊ ကြွက်သားနှင့် အခြားတစ်ရှူးများ။
နမူနာ lysis မှ ထုတ်လွှတ်သော DNA- PCR နမူနာပုံစံအဖြစ်သာ အသုံးပြုသည်။
အစုံအလင်ကို အောက်ပါရည်ရွယ်ချက်များအတွက် သုံးနိုင်သည်- transgenosis ကို ဖော်ထုတ်ခြင်း၊ တိရစ္ဆာန် မျိုးရိုးလိုက်ခြင်း စသည်တို့။
လုပ်ငန်းအသွားအလာ
သိုလှောင်မှုနှင့် စင်သက်တမ်း
ဤကိရိယာ၏အပိုင်း I ကို 2-8 ဒီဂရီတွင်သိမ်းဆည်းသင့်သည်။
Buffer AL ဓါတ်ကို ခြောက်သွေ့သောအခြေအနေအောက်တွင် 12 လကြာ သိမ်းဆည်းထားနိုင်သည်။2-8 ℃ တွင် ကြာကြာသိမ်းဆည်းနိုင်သည်။
Reagent Foregene Protease တွင်ထူးခြားသောဖော်မြူလာရှိသည်။၎င်း၏လုပ်ဆောင်ချက်နှင့် တည်ငြိမ်မှုရှိစေရန် ကျေးဇူးပြု၍ 4 ℃ တွင် 12 လကြာ သိမ်းဆည်းပါ။
Reagent 6×DNA Loading Buffer ကို 4 ℃ သို့မဟုတ် -20 ℃ တွင် အချိန်ကြာမြင့်စွာ သိမ်းဆည်းနိုင်သည်။
ဤကိရိယာ၏အပိုင်း II ကို -20 ℃တွင်သိမ်းဆည်းသင့်သည်။
Reagent 2×M1 PCR EasyTM Mix(UNG) ကို မကြာခဏအသုံးပြုပါက၊ ၎င်းကို ရေတိုသိုလှောင်မှုအတွက် 4℃ တွင် သိမ်းဆည်းထားနိုင်သည် (10 ရက်အတွင်းအသုံးပြုနိုင်သည်)။